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非洲猪瘟(VP72)标记抗体

非洲猪瘟(VP72)标记抗体

产品时间:2021-03-09

简要描述:

非洲猪瘟(VP72)标记抗体
非洲猪瘟(African Swine Fever, ASF)是由ASFV引起的猪的急性、烈性传染病,以全身出血、呼吸障碍和神经症状为主要特征,强毒株感染的发病率和死亡率及高,对养猪业危害巨大,是各国严密防范的传染病,也是世界猪病研究的重点。

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非洲猪瘟(VP72)标记抗体目前我国尚无本病的发生。但随着贸易和人员交往的日益频繁,该病传入我国的风险是存在的,因此建立快速诊断方法十分必要。 为了建立ASFV特异抗体检测方法,本研究根据国外发表的ASFV VP72基因序列设计引物,以英国动物健康研究所提供的含VP72基因的质粒为模板,扩增VP72基因及其可溶性抗原片断VP72S,将其插入pUC载体中进行测序,所获序列与已发表的ASFV-VP72(Ba71株)完全相同。将测序正确的VP72和VP72S基因克隆入pGEX-6p-1载体中GST基因的下游,重组大肠杆菌用IPTG诱导表达,并采用不同方法纯化得GST融合蛋白。将VP72基因克隆入真核表达pcDNA3中,重组载体用多聚乙酸亚胺包裹后基因免疫8周龄小鼠,用制备的血清对原核表达产物进行Western-blotting验证,结果表明,本实验原核表达的重组VP72是正确的,具有抗原性,可以作为检测ASF特异抗体的抗原,并为特异单抗制备提供了免疫原。以表达的融合蛋白为包被抗原,以基因免疫鼠血清为阳性抗体,建立了检测ASFV抗体的ELISA方法,可用于ASFV血清学诊断和流行病学调查。非洲猪瘟病毒体内感染的主要细胞类型为单核-巨噬细胞系统, 包括组织巨噬细胞和网状内皮细胞, 也能在鸡胚卵黄囊和骨髓细胞中增殖。在体外, 用于病毒分离培养的细胞分2类:一类为原代细胞, 主要为单核-巨噬细胞, 接种48h后, 细胞圆缩肿大, 随后脱落、溶解;另一类为传代细胞系, 比如猪肾细胞系 (PK) 、乳仓鼠肾细胞 (BHK-21) 、非洲绿猴肾细胞 (Vero) 以及猪细胞 (ST) 等, 但传代细胞对野毒株较不敏感。一些分离株已适应传代细胞系, 并可以产生细胞病变。

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