重组牛肠激酶(rb-EK) 分子生物试剂

重组牛肠激酶(rb-EK)：重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，哺乳动物细胞蛋白表达，酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。

高特异性

1）特定的蛋白酶，切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸 (DDDDK)

2）不含其他蛋白酶,无非特异性切割

图一：SDS-PAGE检测结果，纯化的肠激酶一个单一的主带

图二：0.1U的EK作用于50µg底物0min,10 min,20 min,30 min,40 min,50 min,60 min后的SDS-PAGE分析

活性：1U定义：在25℃，12h~16h之内，将0.50mg融合蛋白在25mM Tris-HCl8.0缓冲液中切割95%所需的酶量。

酶切条件：按照酶活性定义，重组EK酶切条件举例：25mM Tris-HCl 8.0体系中：

融合蛋白浓度        0.1-1mg/ml （蛋白总量0.50-1.0mg）

重组EK用量          1.0-2.0U

温度                       25℃过夜酶切，或完全酶切需12h-16h。

常见影响肠激酶活性的因素：在＞200mM 咪唑，或＞200mM NaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：

1）为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，再进行酶切。

2）若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切0.5mg蛋白）。

3）如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。

稳定性：可以在常温下运输，在37℃，可稳定保存一周。

酶液可反复冻融数次，对酶活无影响。

来源及用途：本产品来源于重组大肠杆菌，用于去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。

储存条件：-20℃，避光防潮密闭干燥。

运输条件：2~8℃运输

重组牛肠激酶(rb-EK)