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重组牛肠激酶(rb-EK) 分子生物试剂

重组牛肠激酶(rb-EK) 分子生物试剂

产品时间:2023-05-23

简要描述:

重组牛肠激酶(rb-EK):重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。

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重组牛肠激酶(rb-EK):重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。


高特异性

1)特定的蛋白酶,切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸 (DDDDK)

2)不含其他蛋白酶,无非特异性切割

图一:SDS-PAGE检测结果,纯化的肠激酶一个单一的主带

图二:0.1U的EK作用于50µg底物0min,10 min,20 min,30 min,40 min,50 min,60 min后的SDS-PAGE分析

活性:1U定义:在25℃,12h~16h之内,将0.50mg融合蛋白在25mM Tris-HCl8.0缓冲液中切割95%所需的酶量。

酶切条件:按照酶活性定义,重组EK酶切条件举例:25mM Tris-HCl 8.0体系中:

融合蛋白浓度        0.1-1mg/ml (蛋白总量0.50-1.0mg)

重组EK用量          1.0-2.0U

温度                       25℃过夜酶切,或完全酶切需12h-16h。

常见影响肠激酶活性的因素:在>200mM 咪唑,或>200mM NaCl,或>5%甘油,酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切:

1)为获得理想酶切结果,请将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,再进行酶切。

2)若不便透析,可将样品稀释,咪唑含量在100mM以下,NaCl浓度在50mM以下,甘油浓度小于5%以下进行酶切,酶的用量与蛋白的比例不变(即1U酶切0.5mg蛋白)。

3)如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种,且不便去除,此时适当增加酶量或延长酶切时间,也可达到较好酶切效果。

稳定性:可以在常温下运输,在37℃,可稳定保存一周。

酶液可反复冻融数次,对酶活无影响。

来源及用途:本产品来源于重组大肠杆菌,用于去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签。

储存条件:-20℃,避光防潮密闭干燥。

运输条件:2~8℃运输


重组牛肠激酶(rb-EK)

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