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NP-40 LYSIS BUFFER 裂解液

NP-40 LYSIS BUFFER 裂解液

产品时间:2024-03-13

简要描述:

NP-40 LYSIS BUFFER 裂解液
NP-40 裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。

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NP-40 LYSIS BUFFER 裂解液


产品规格】 :100ml /500ml

储存条件】 :-20

有效期】 :12个月

产品简介】 :

NP-40 裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGEWestern、免疫沉淀(immunol precipitationIP)、免疫共沉淀(co-IP) ELISA 等。可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。

NP-40 裂解液的主要成分为 Tris(pH7.4)NaCl1% NP-40EDTA 以及磷酸酶抑制剂。此外,本产品还赠送一支 PMSF,可以有效抑制蛋白降解。

NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

 

本产品仅供科研实验用,不做其它用途!

 

操作步骤(仅供参考)

1. 对于培养细胞样品:

(1) 融解 NP-40 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM,或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

(2) 对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解 2-10min

对于悬浮细胞:离心收集细胞,轻轻 vortex 或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。

对于细菌或酵母:对于 1mL 菌液或酵母液,离心去上清,如果有必要可以使用 PBS 洗涤一次,充分去除液体后,轻轻 vortex 或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入 100-200 微升裂解液,轻轻 vortex 或者弹击管底以混匀,冰上裂解 2-10min。如果希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解。

裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞或者 1mL 的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入 150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。每 100 万动物细胞用 100 微升本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为 2-4mg/ml,不同细胞有所不同。

(3) 充分裂解后,10000-14000 g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGEWestern 和免疫沉淀等操作。

2. 对于组织样品:

(1) 把组织剪切成细小的碎片。

(2) 融解 NP-40 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1 mM,或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

(3) 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

(4) 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨,研磨充分后加入裂解液进行裂解。

(5) 充分裂解后,10000-14000 g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGEWestern 和免疫沉淀等操作。

(6) 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器或研磨设备,缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。

 

注意事项】 :

1. 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃ 进行。

3. 对于某些难溶解蛋白的 Western,如果发现 Western IP 细胞裂解液 效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如 RIPA 裂解液或 SDS 裂解液。

4. 如果发现 IP 的时候背景很高,即非特异的蛋白也被 IP 下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如高效 RIPA 裂解液(EX6010)。如果发现目的蛋白无法被 IP 下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如普通 RIPA 裂解液(EX6020)或 NP-40 裂解液(EX6035)。

5. 本产品仅限于科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 


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