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红细胞裂解液-关于样本的处理
更新时间:2022-11-22   点击次数:341次

红细胞裂解液-关于样本的处理


产品简介:

本产品是利用细胞内外存在盐离子浓度差而导致细胞膜胀破的原理来裂解无核红细胞的。本产品经无菌处理,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。


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红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer,或称 ACK Lysis Buffer)是一种去除红细胞简便易行的方法,即用裂解液裂解红细胞,它既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞,可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。


使用说明:

1. 1倍体积的新鲜全血,加入3倍体积的红细胞裂解液。如1ml新鲜全血加入3ml红细胞裂解液,轻轻涡旋或颠倒混匀。

2. 冰上放置15分钟,其间轻轻涡旋混匀两次,红细胞裂解后,溶液应该是清亮透明的。

3. 收集细胞:4℃,450×g离心10分钟以沉淀白细胞,小心吸弃上清液。

4. 向白细胞沉淀中加入两倍体积的红细胞裂解液,轻轻涡旋充分重悬白细胞。如起始血液为1ml,则加入2ml的红细胞裂解液。

5. 4℃,450×g离心10分钟沉淀白细胞,小心并*吸去上清液。    6. 重悬细胞,用于后续实验;如提取RNA,于此步开始使用DEPC水配制的溶液进行操作。  (组织细胞处理:新鲜组织经胰-酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液,离心弃去上清液,其余同上。)


组织细胞样品:

1.新鲜组织经胰-酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液,离心弃去上清液;

2.从4℃冰箱中取出ELS裂解液,按1:3-5的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml细胞压积加入3-5ml裂解液),轻轻吹打混匀;

3.800-1000rpm离心5-8分钟,离心弃去上层红色清液;

4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或无血清培养液离心洗2-3次;

5.如裂解不完-全可重复步骤2和3;

6.重悬细胞,用于后续实验;如提取RNA,最好是于步骤4开始使用DEPC水配制的溶液中进行。


注意事项:

本裂解液为无菌产品,分离细胞用于细胞培养时请注意无菌操作。

为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。




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