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GST-琼脂糖凝胶4B预装柱使用说明
更新时间:2022-12-20   点击次数:505次

GST-琼脂糖凝胶4B预装柱使用说明


相关介绍:

GST-琼脂糖凝胶4B是一种将谷胱-甘肽键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质,主要用于谷胱-甘肽转移酶标记蛋白(GST融合蛋白)、谷胱-甘肽转移酶和谷胱-甘肽依赖蛋白的分离纯化,通过一步亲和层析,就能获得高纯度的蛋白。与GST-琼脂糖凝胶FF相比,GST-琼脂糖凝胶4B能获得更高的载量。


品  名:GST-琼脂糖凝胶4B

英文名:Glutathione NUPharose 4B

规  格:20 ml,100 ml

运  输:2 ~ 30℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2~8℃


使用方法:

1. 装柱

1.1 根据分离目标性质配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

1.2 将凝胶抽干,并用蒸馏水洗涤2次去除保存的乙醇,用蒸馏水配成匀浆并脱气。

1.3 将层析柱垂直固定,底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。

1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,使凝胶在柱内自由沉降。

1.5 连结好柱子顶端活动柱头,打开蠕动泵,让缓冲液用使用时操作流速流过5柱体积,再使用1.5倍的操作流速流过5柱体积,调节适配柱头,使其尽量贴近胶面,最后用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

注意:(1)所有操作过程不能引入气泡,保证装胶的均匀度。(3)如无条件做1.2,填料层有气泡,可进行2次装柱,去除保存的乙醇和气泡。(4)乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。

2. 平衡

将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱,观察检测器的变化,直到电导、pH等参数不变。推荐的结合平衡缓冲液为:10mM PBS (140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH 7.4)。

3. 上样

切换转换阀进行上样,上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择,也可进行线性实验找到最佳上样量;样品的预处理:置换缓冲液,澄清过滤(0.45、0.22μm)等。

4. 冲洗

用2-3个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱,观察检测器的变化,直到电导、pH等参数不变,此时未交换的组分被清洗出去。

5. 洗脱

一般推荐用10mM还原型谷胱-甘肽溶液(可含缓冲成分)进行洗脱。推荐的洗脱缓冲液为:50mM Tris-HCl, 10 mM 还原型谷胱-甘肽(GSH), pH 8.0。

6. 再生

用蒸馏水按操作流速冲洗3-5个柱体积,接着用平衡液洗到平衡3-5个柱体积。

若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

7. 在位清洗(CIP)

去除沉淀和变性蛋白:用2CV 6M盐酸胍清洗,立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。

去除强疏水蛋白:用3-4CV 70%乙醇清洗,立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。


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