GST-琼脂糖凝胶4B预装柱使用说明

相关介绍：

GST-琼脂糖凝胶4B是一种将谷胱-甘肽键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质，主要用于谷胱-甘肽转移酶标记蛋白（GST融合蛋白）、谷胱-甘肽转移酶和谷胱-甘肽依赖蛋白的分离纯化，通过一步亲和层析，就能获得高纯度的蛋白。与GST-琼脂糖凝胶FF相比，GST-琼脂糖凝胶4B能获得更高的载量。

品  名：GST-琼脂糖凝胶4B

英文名：Glutathione NUPharose 4B

规  格：20 ml，100 ml

运  输：2 ~ 30℃，常压、避光

贮  存：20%乙醇，2~8℃

使用方法：

1. 装柱

1.1 根据分离目标性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

1.2 将凝胶抽干，并用蒸馏水洗涤2次去除保存的乙醇，用蒸馏水配成匀浆并脱气。

1.3 将层析柱垂直固定，底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。

1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，使凝胶在柱内自由沉降。

1.5 连结好柱子顶端活动柱头，打开蠕动泵，让缓冲液用使用时操作流速流过5柱体积，再使用1.5倍的操作流速流过5柱体积，调节适配柱头，使其尽量贴近胶面，最后用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

注意：（1）所有操作过程不能引入气泡，保证装胶的均匀度。（3）如无条件做1.2，填料层有气泡，可进行2次装柱，去除保存的乙醇和气泡。（4）乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。

2. 平衡

将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH等参数不变。推荐的结合平衡缓冲液为：10mM PBS (140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH 7.4)。

3. 上样

切换转换阀进行上样，上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可进行线性实验找到最佳上样量；样品的预处理：置换缓冲液，澄清过滤（0.45、0.22μm）等。

4. 冲洗

用2-3个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH等参数不变，此时未交换的组分被清洗出去。

5. 洗脱

一般推荐用10mM还原型谷胱-甘肽溶液（可含缓冲成分）进行洗脱。推荐的洗脱缓冲液为：50mM Tris-HCl, 10 mM 还原型谷胱-甘肽(GSH), pH 8.0。

6. 再生

用蒸馏水按操作流速冲洗3-5个柱体积，接着用平衡液洗到平衡3-5个柱体积。

若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7. 在位清洗(CIP)

去除沉淀和变性蛋白：用2CV 6M盐酸胍清洗，立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。

去除强疏水蛋白：用3-4CV 70%乙醇清洗，立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。