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凝血酶(Thrombin)的用途
更新时间:2023-08-30   点击次数:314次

凝血酶(Thrombin的用途

来源:牛血浆

性状:白色或微黄色冻干粉

规格:1000U/

保存:冻干粉4-8℃

纯度:SDS-PAGE电泳纯度≥95%(无蛋白酶)

比活:≥2000U/mgpr

使用方法:生理盐水溶解使用,复溶后-20度冻存,避免反复冻融

用途:凝血酶时间检测试剂(TT)配制、纤维蛋白原检测试剂(FIB)配制、TB位点酶切、纳豆激酶活力测定、尿激酶活力测定等,非临床治疗使用。


简介:凝血酶(Thrombin)来源于牛血浆,分子量37KD,是由两条肽链(31KD6KD)通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原(凝血因子)激活后形成的蛋白质水解酶,其催化纤维蛋白原(fibrinogen)水解掉A肽和B肽,由此形成纤维蛋白单体,单体进一步聚合。

由于凝血酶具有切割序列专一性强,水解效率高的特点,它被广泛地应用于基因工程产品的开发,其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂,尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。

凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶,能够有效切质量比仅为1:2000的蛋白。建议消化缓冲液:20mMTris-HCl缓冲液,150mM NaClpH8.0,于20℃37℃之间切割0.316小时,1U可切割约0.1-0.5mg蛋白。

凝血酶最佳切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',这里X4X3是疏水氨基酸而X1'X2'是非酸性氨基酸,一些经常使用的识别位点L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他识别位点是X2-R[K]-X1',这里X2或者X1'是甘氨酸,例如A-R-GG-K-A,这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和N末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切,通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完-全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。


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