谷丙转氨酶（ALT/GPT）测试盒的测定原理

（微板法）

一、测定原理：

谷丙转氨酶（ALT）在 37℃及 PH7.4 条件下，作用于丙

氨酸及α-酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应

30min 后（固定时间）加入 2,4-二硝基苯肼（DNPH）盐酸溶

液，既中止反应，同时 DNPH 与酮酸中羰基加成，生成丙酮

酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于 505nm 比读吸光度

并计算酶活力。

二、试剂的组成与配制：(96T)

试剂一:谷丙转氨酶基质液,5mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 个月；

试剂二:2,4—二硝基苯肼液,5mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 个月；

试剂三:4mol/L 氢氧化钠液,5mL×1 瓶，室温密封保存 6 个月；

0.4mol/L 氢氧化钠液的配制,临用时按 4mol/L 氢氧化钠液:双

蒸水=1∶9 的比例稀释，需多少配多少，室温密封保存。

试剂四:2mmol/mL 丙酮酸钠标准液×1 支，4℃冰箱保存 6 个月；

试剂五:0.1mol/L 磷酸盐缓冲液×1 支，4℃冰箱保存 6 个月。

三、操作过程：

1、样本前处理:

①、血清（浆）及其它液体样本待测：直接测定。

②、动物组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积

(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件

下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液待测。

③、培养细胞样本前处理：将收集好的细胞用等渗缓冲液（推

荐 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水）清洗 1～

2 次；1000 转/分,离心 10 分钟,弃上清,留细胞沉淀，加入匀

浆介质（推荐加入 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生

理盐水），冰水浴条件下超声破碎或手动匀浆，制备好的

匀浆液不离心，待测。

2、操作表:

1、比色法中常用的有赖氏（Reitman-Frankel）法及金氏（King）

法。赖氏法标准曲线所定单位数，是用实验方法和卡门氏分

光

光度法（速率法）作对比测定求得的。以卡门氏单位报

告结果，比较准确。

卡门氏单位定义：1mL 液体，反应液总容量 3mL，波长 340nm，

1cm 光径，25℃，1min 内所生成的丙酮酸，使 NADH 氧化

成 NAD+而引起吸光度每下降 0.001 为一个单位（1 卡门氏

单位=0.482 U/L，25℃）。

2、一般血清标本内源性酮酸很少，血清对照孔吸光度值接近试

剂空白孔（以双蒸水代替血清，其他和对照孔同样操作）。

所以，成批标本测定时，一般不需要每一标本都作本身血清

对照孔，以试剂空白孔代替即可，但对脂血、黄疸或溶血血

清，每份标本应作对照孔。

3、酶活力超过 150 卡门氏单位时，用生理盐水稀释血清后重测。

4、应将一般血清的对照孔（或称标本空白孔）的吸光度作为日

常质控的指标之一；如相差大，可考虑α-酮戊二酸浓度、DNPH

浓度及仪器等原因引起。

5、血清中 ALT 在室温（25℃）可保存 2 天，在 0～4℃可保存一

周，在-25℃可保存 1 个月。

附录Ⅰ：ALT 标准曲线

1、操作表:

附录Ⅱ：组织中 ALT 测定

1、样本前处理：

准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9 的比例,加入 9 倍体

积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,制成 10%的组织匀浆,2500

转/分,离心10分钟,取上清液,再用生理盐水稀释到适宜浓度(通过标

准曲线后计算得匀浆液卡门氏单位值小于 150)待测。(取部分上清

液测蛋白浓度,蛋白定量试剂盒本所有售)

2、操作表：

组织中 活力= 通过标准曲线得 ¸待测匀浆液蛋白

匀浆液ALT活力 浓度

附录Ⅲ：血清（浆）中 ALT 测定

1、前处理：

血清(浆)直接取样进行测定。（若酶活力超过 150 卡门氏单位

时，需用生理盐水稀释血清后重新测定）

2、操作表：

 谷丙转氨酶（ALT/GPT）测试盒的测定原理