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小鼠白细胞介素 4(IL-4)ELISA试剂盒的组成
更新时间:2024-02-28   点击次数:63次

小鼠白细胞介素 4(IL-4)ELISA试剂盒的组成

检测原理

 

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠白细胞介素 4(IL-4)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠白细胞介素 4(IL-4)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完-全溶解后再使用。样本在使用也要在室温平衡60分钟

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3.  预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

 

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12孔×8条

12孔×4条

标准品

0.3mL

0.3mL

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2张

2张

说明书

1份

1份

自封袋

1个

1个

 

注:标准品浓度依次为:160、80、40、20、10、0 pg/mL.


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