产品说明：脂质过氧化物（lipid hydroperoxide LPO）是不饱和脂肪酸链经自由基或活性氧作用后产生的过氧化物。病理情况下，脂质过氧化反应增强可导致原本低含量的 LPO 升高。LPO 含量升高会对细胞的结构和功能造成损伤，LPO含量与机体免疫系统和衰老密切相关。LPO 在酸性条件下加热产生丙二醛（MDA），MDA 与硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成棕红色物质三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮），其最大吸收波长在 532nm，进行比色后可估测样本中 LPO 的含量。 

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸馏水。

溶液的配制：1. 试剂二：临用前取 1 瓶试剂二加入 14mL 蒸馏水，此试剂较难溶，可以 70℃加热并剧烈振荡以促进溶解，或者通过超声处理以促进溶解。每次用前需检查是否有粉剂析出。用不完的试剂可在 2-8℃中保存一个月。2. 标准品：为 1000nmol/mL 的标准溶液。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量）1、组织：按照样本质量（g）：提取液体积（mL）为 1:5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清置冰上待测。Heating MDA+ TBAH+3,5,5-Trimethyloxazolidine-2,4-dione (532 nm)H+LPOHeating2、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000:1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液）加入提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min），8000g 4℃离心 10min，取上清置冰上待测。3、培养液或其他液体：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。 

注意事项：1. 待测液如果有密集小气泡，建议静置 20min 左右等待气泡消失再测，以免影响测定结果，如果有少量气泡可以通过低速离心或轻磕等方式来消除。2. 待测液如果尚未澄清，可吸取上清液后再次离心。3. 为防止水浴 60min 过程中水分散失，建议使用螺旋管或用封口膜给 EP 管缠口。4. 如果用高温助溶试剂二，需要待其冷却至室温后再使用。5. 如果测定吸光值过低或接近空白，适当延长反应时间或加大样本量后，重新测定。如果吸光值过大或超过检测范围（A532＞1.5 或者 ΔA＞1.5 时），建议将样本适当稀释后进行测定。注意同步修改计算公式。