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谷氨酰胺合成酶检测试剂盒检测速度就是快!
更新时间:2018-07-04   点击次数:1235次

谷氨酰胺合成酶检测试剂盒检测速度就是快!

谷氮酰胺合成酶,是衡量植物氮素同化水平的一项重要生理指标。谷氨酰胺这种氨基酸,不仅被细胞用来合成蛋白质,也是用来运输氨的。自由的铵离子对生物有毒性,在血液中不能太多,但是一些生物过程又会产生游离的铵离子;所以就让谷氨酰胺来运输这些铵离子。当细胞需要运输多余的铵离子的时候,就用铵离子和谷氨酸来合成谷氨酰胺,同时消耗ATP。谷氨酰胺合成酶催化的就是这个反应。这个反应分成两步进行,酶先让ATP和谷氨酸反应,生成γ-谷氨酰;接着铵离子上来,替换掉。在高等植物的研究中,GS也常被定义为植物氨同化所必需的酶。人谷氨酰胺合成酶叫做hGS。

测定原理
GS 在ATP 和Mg2+存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为γ─
谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下与铁形成红色的络合物;该络合物在540nm 处有大吸
收峰,可用分光光度计测定。

所需的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:10mL×1 瓶,-20℃保存。
试剂二:10mL×1 瓶,-20℃保存。
试剂三:粉剂×2 瓶,-20℃保存。用时每瓶加入5mL 蒸馏水充分溶解备用,用不完的试剂仍
-20℃保存。
试剂四:15mL×1 瓶,4℃保存。

 

谷氨酰胺合成酶检测试剂盒检测速度就是快!

 

样本测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(104 个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 提
取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次);
8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,
加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。

产品优点如下:

1、快速简便:操作时间短,48-50T,可测40例样本左右,96-100T,可测80例样本左右;
2、取样量微:常规操作取样量50l, 酶标仪操作仅需5l即可检测,部分试剂盒取样多少请;
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效;
4、再现性好:20倍稀释线性仍然良好;
5、回收试验: X =99%;
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强;
7、测试面广:可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等,部分试剂盒适用于检测植物,可以。

 

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