明胶酶谱法分析试剂盒配置溶液时需要注意哪些问题！

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程，其在诊断和治疗中的意义日益受到重视。

酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1%明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在蓝色背景下可出现白色条带，条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。

明胶酶谱法分析试剂盒配置溶液时需要注意哪些问题！

溶液配制方法：

1. 染色液配方：0.25g 考马斯亮蓝R250+420ml 甲醇+100ml 冰乙酸，定容至1000ml，混合1h 后用
Whatman 1 号滤纸过滤，于室温可无限期保存；

2. 脱色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；

3. 保存液：7％冰醋酸；

4. 凝胶染色之后，染色液可以回收利用，装入新容器内，室温或4 ºC 保存，可反复使用2-4 次。

相关文献支持：

1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494

2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamidegels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem，1980,102,196–202

3.绿茶多酚EGCG增强动脉粥样硬化斑块稳定性及其相关机制研究

明胶酶谱法分析试剂盒配置溶液时需要注意哪些问题！