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培养霉菌斜面转接
发布时间:2021-03-22   点击次数:277次

培养霉菌斜面转接

如何让霉菌产孢子?
一般微生物都会在逆境下产孢子,比如低温、紫外照射等恶劣的生存条件,有的情况下,阳光照射也能促使产孢。不同的菌的产孢条件还不太一样,要因菌而异,和培养基也有关。可以找找相关资料查查产孢培养基,可以试试水琼脂培养基(直接在水中加琼脂、无其他营养物质)。

操作步骤:
一、开箱检查:

打开包装箱,查看斜面是否破损,菌株编号与说明书是否一致。

二、实验准备:

仔细阅读菌株说明书,准备2个新鲜平板或斜面。

三、器材灭菌:

斜面试管表面消毒后,转移至生物安全柜中,管口灼烧灭菌冷却备用。接种锄和接种铲在酒精灯外焰翻转灼烧灭菌3-5分钟,冷却备用,冷却后用接种锄在斜面上相距0.5cm处切两条平行线(与试管垂直)。

四、切分斜面:

换接种铲在两条平行线之间相距0.5cm处切两条平行线(与试管平行),形成0.5cm*0.5cm的小正方形菌块。

五、霉菌转接:

用接种铲挑取菌块平放到平板或斜面(固体琼脂表面)上(菌块正面朝上)。转接多个平板或斜面,重复以上操作即可。

六、完成培养:

平板正放,斜面倾斜放置于霉菌培养箱中培养。(参照菌种说明书上的培养条件设置温度)

(1) 实验材料 

根霉,毛霉,黑曲霉,青霉,土豆琼脂培养基,培养皿,载玻片,盖玻片,镊子,显微镜,小刀,U形管等。 

(2) 实验步骤 

1、配置培养基:根据原料用量配置土豆培养基。配置时,先急火煮沸,在温火加热20min,若有浑浊出现,则需过滤,然后定容。包扎土豆培养基,甘油等其他用品。灭菌后取出备用2、培养小室准备及灭菌 在培养皿底部铺一张略小于皿底的圆形滤纸片,滤纸片上依次放上“U”形载玻片搁架、载玻片、盖玻片-四片,盖上皿盖,牛皮纸包扎,于恒温干燥箱中121℃灭菌30min烘干备用;

2、琼脂薄片制作:

a) 将稍微冷却的培养基,倒在培养皿 中,做成薄平板。培养基应该要倒 得薄而均匀。注意无菌操作。

b) 用解剖刀将琼脂薄平板切成边长不大于1cm的琼脂薄片

c) 用解剖刀将琼脂薄片移至小室载玻片上(一个载玻片上方两块薄片)

3、取菌接种:用接种环挑取少量待观察的霉菌孢子(霉菌菌种的表面轻轻刮取即可),接种于固体培养基边缘,以便于霉菌生长。接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻碰几下即可。接种量要少,以免培养后菌丝过于稠密而影响观察。

4、加盖玻片:用无菌镊子将皿内的盖玻片盖在琼脂薄层上,用镊子轻压盖玻片,使盖玻片和载玻片之间的距离相当接近,但不能压扁。盖玻片不能紧贴载玻片,要彼此留有小缝隙,一是为了通气,二是使各部分结构平行排列,易于观察。

5、倒保湿剂:每皿倒入约2-3mL 20%的经灭菌处理的甘油,使皿内滤纸完全湿润,以保持皿内湿度,盖上皿盖。制成载玻片湿室。
6、正置培养:将平皿置于27℃霉菌培养箱中培养一周。

7、观察: 将培养好的载玻片取出,置于显微镜下直接观察。 

(3)实验结果及分析 

实验结果 

1.根霉:菌丝无隔,有假根、匍匐菌丝。假根着生处有向上直立的孢囊梗,其顶端膨大成孢子囊,底部为半球形囊轴。

2.毛霉:孢囊梗直接由菌丝出,顶端为球形孢子囊 

3.黑曲霉:菌丝有隔,气生菌丝分化为分生孢子梗(无隔),顶端 膨胀为球状顶囊。

4.青霉:菌丝有隔,分生孢子梗顶端不膨大,无顶囊,多次分枝成几轮小梗,小梗顶端长孢子。分生孢子梗呈扫帚状。

 

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