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谷氨酸(Glu)含量测定试剂盒说明书

点击次数:989 发布时间:2018/3/30
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测定意义:
Glu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20 种氨基酸之一,
而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu 还是
味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生物试剂。

测定原理:
利用提取液提取,然后用显色剂进行显色,显色后在570nm 下进行测定。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、
蒸馏水。

试剂的组成和配制:
试剂一:液体120mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶, 4℃保存;临用前加入5mL 蒸馏水充分溶解混匀,用不完的试剂仍 4℃
保存。

谷氨酸提取:
1、细菌或培养细胞样品:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞
数量(104 个):试剂一体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL
试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30
次);8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组
织,加入1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)或细胞培养液样品:按照血清(浆)或细胞培养液体积(mL):试剂一体积
(mL)为1:5~10 的比例(建议取0.1mL 血清(浆)或者细胞培养液加入1mL 试剂一),进
行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。
2、 在有盖EP 管中加入下列试剂:

试剂名称(μL) 测定管 对照管
样本 250
试剂一 250
试剂二 50 50
混匀,90℃水浴20min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却,取200uL 至微量石英比色皿
或96 孔板中,于570nm 波长处记录吸光值A。△A=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一
管。

注意事项:
为提高检测灵敏度,测定管的吸光值应小于1,若大于1 则需要将上清液用试剂一稀释至适
当倍数后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。

 
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