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谷胱甘肽S-转移酶试剂盒产品说明书

点击次数:956 发布时间:2018/5/23
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谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)试剂盒
分光光度法
规格:50T/48S
产品内容:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加5 mL 蒸馏水溶解。

产品说明:
GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。GST 是体内解毒酶系统
的重要组成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH 的巯基共价结合,使亲电化合物变
为亲水物质,易于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外
的目的。因此,GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外,因
为GST 具有GSH-Px 活性,亦称为non-Se GSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质
等的功能。注意,GST 催化的反应减少GSH 含量,但是不增加GSSG 含量。
GST 催化GSH 与CDNB 结合,其结合产物的光吸收峰波长为340nm;通过测定340nm 波长
处吸光度上升速率,即可计算出GST 活性。

自备仪器和用品:
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤:
一、粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入
1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500
万细胞加入1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3 秒,间隔7 秒,总时间
3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。

二、测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂三放在25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)保温。
3. 空白管:取1mL 石英比色皿,加入100μL 试剂一,900μL 试剂二和100μL 试剂三,迅速混匀后
于340nm 测定吸光度变化,记录10 s 和310 s 吸光度为A1 和A2。
4. 测定管:取1mL 石英比色皿,加入100μL 上清液,900μL 试剂二和100μL 试剂三,迅速混匀后
于340nm 测定吸光度变化,记录10 s 和310 s 吸光度为A3 和A4。

注意:空白管只需测定一次。

1. 样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力;
2. 细胞中GST 活性测定时,细胞数目须在300 万-500 万之间,细胞中GST 的提取时可加试剂一
后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞;
3. 本法测定GST 活性的线性范围可达76 μmol/min /L,测定前先用1~2 个样做预实验,如5min
内反应不成线性,须对样品用蒸馏水稀释,计算结果乘以稀释倍数;
4. 测定反映的温度对测定结果有影响,请控制在25℃或者37℃(哺乳动物)。

 
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