羟检测试剂盒(分光光度法)说明书 规格: 50T/48S 产品简介: HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP 含量是反映 胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。 样品经水解产生游离的HYP,进一补被氯胺T 氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物, 在560nm 处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm 吸光值,可计算HYP 含量。 产品内容: 组织提取液:6mol/L 盐酸,自备。浓盐酸:H2O(V/V)= 1:1,室温保存; 细胞提取液:液体100mL×1 瓶,4 ℃保存; 试剂一:液体10mL×1 瓶,4 ℃避光保存; 试剂二:液体10mL×1 瓶,4 ℃避光保存。 操作步骤: 一、羟提取: 1. 组织:取约0.5g 样品于玻璃管,加入5mL 的组提取液,置于110℃烘箱,水解6 至12 小时,16000rpm,25℃, 离心20min,用提取液定容至5mL,取上清待测。 2. 细胞:取约500 万个细胞,加入2mL 的细胞提取液,于高压消毒器中15 磅保持30min,自然降压后待测。 二、测定操作: 对照管测定管 样本(mL) 0.2 试剂一(mL) 0.2 0.2 混匀,室温静置20min 试剂二(mL) 0.2 0.2 H2O(mL) 0.6 0.4 混匀,60℃,20min,取出后室温静置15 min,测定A560。(A560=A 测定-A 对照) 羟含量计算: 标准曲线:y=64.875x+ 0.0251,R2=0.9991 (1)按组织计算 HYP 含量(mg/g) =(A560-0.0251)÷64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) =0.385×(A560-0.0251)÷W (3)按细胞计算: HYP 含量(mg/104cell)= (A560-0.0251)÷64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个) =0.154×(A560-0.0251)÷细胞数量(万个) V 反总:反应体系总体积,1mL; V 样:反应中样本体积,0.2mL;V 样总:加入提取液体积,mL; W: 样本质量,g。 注意事项: 1、OD 值大于0.8,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。 2、试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触。 |