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羟检测试剂盒(分光光度法)说明书

点击次数:965 发布时间:2018/6/14
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羟检测试剂盒(分光光度法)说明书
规格: 50T/48S
产品简介:
HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP 含量是反映
胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样品经水解产生游离的HYP,进一补被氯胺T 氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,
在560nm 处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm 吸光值,可计算HYP 含量。
产品内容:
组织提取液:6mol/L 盐酸,自备。浓盐酸:H2O(V/V)= 1:1,室温保存;
细胞提取液:液体100mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂一:液体10mL×1 瓶,4 ℃避光保存;
试剂二:液体10mL×1 瓶,4 ℃避光保存。
操作步骤:
一、羟提取:
1. 组织:取约0.5g 样品于玻璃管,加入5mL 的组提取液,置于110℃烘箱,水解6 至12 小时,16000rpm,25℃,
离心20min,用提取液定容至5mL,取上清待测。
2. 细胞:取约500 万个细胞,加入2mL 的细胞提取液,于高压消毒器中15 磅保持30min,自然降压后待测。
二、测定操作:
对照管测定管
样本(mL) 0.2
试剂一(mL) 0.2 0.2
混匀,室温静置20min
试剂二(mL) 0.2 0.2
H2O(mL) 0.6 0.4
混匀,60℃,20min,取出后室温静置15 min,测定A560。(A560=A 测定-A 对照)
羟含量计算:
标准曲线:y=64.875x+ 0.0251,R2=0.9991
(1)按组织计算
HYP 含量(mg/g) =(A560-0.0251)÷64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=0.385×(A560-0.0251)÷W
(3)按细胞计算:
HYP 含量(mg/104cell)= (A560-0.0251)÷64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)
=0.154×(A560-0.0251)÷细胞数量(万个)
V 反总:反应体系总体积,1mL; V 样:反应中样本体积,0.2mL;V 样总:加入提取液体积,mL; W:
样本质量,g。
注意事项:
1、OD 值大于0.8,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触。

 
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