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一抗和二抗的实验选择

点击次数:1301 发布时间:2019/3/29
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一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种分析试验验证,如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

根据一抗种属及类型选择合适的二抗广义上是指专门和进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同的二抗,我们能为您的科研工作提供适合和全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也会有不同的检测方案,因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求,一般来说,选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑:

 

【一抗的种属来源】 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可);如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体,则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

 

【一抗的类别亚型】 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是 IgG 类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗 IgG 抗体。其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述,如果你的一抗是小鼠 IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠 IgM。如果单克隆一抗是小鼠 IgG 的某一亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么几乎所有的抗小鼠 IgG 都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠 IgG1,那么你可以选择抗 IgG1 的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下,可以选用抗相应物种 IgG。

 

【二抗的种属来源】 一般来说,不同的种属来源与二抗的质量没有必然的lian系,来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里,如双标实验里,如果其中一个一抗是山羊来源的,一个是小鼠来源的,则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗,这时候,二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。 有相应的驴来源的二抗,非常适合做类似双标的免疫实验。

 

【二抗的耦联标记】 一般来讲,耦联到二抗上的我们探针主要有酶(辣根过氧化酶 HRP 和碱性酶 AP 或其衍生物 APAAP,PAP),荧光基团(FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight 等)、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于 Western Blot 和 ELISA,常用的二抗是酶标二抗;而细胞或组织标记实验(细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术)中通常使用荧光基团标记的二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号,可以使用 Biotin/Avidin 检测系统。在一些荧光检测方案中,则需要选择不同的荧光标记;而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。

 

【是否经过血清吸附过的二抗】如您的检测样本是人源的蛋白,一抗是小鼠源的单克隆抗体,二抗就需要选择抗小鼠源的二抗,如果您对实验的特异性要求很高,那我们向您推荐经过人血清吸附过的抗小鼠源的二抗,这种二抗由于经过人血清吸附而排除了与人源组织(如 IgG 等)可能发生非特异性反应的 IgG,因此将非特异性结合降低到低。

 
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