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游离胆固醇含量测定试剂盒说明书

点击次数:914 发布时间:2019/7/31
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50 管/48 样
择 注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
FC 是构成细胞膜的主要成分,也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素 D 等生
理活性物质的重要原料。FC 浓度可作为脂代谢的指标。
测定原理:
FC 氧化酶催化 FC 生成△4-胆甾烯酮和 H 2 O 2 ,过氧化物酶催化 H 2 O 2 、4-氨基安替比林和酚
生成红色醌类化合物,在 500nm 有吸收峰,其颜色深浅与 FC 含量成正比。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:异丙醇 50mL(自备);
工作液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
标准品:液体 1mL×1 支,浓度为 0.5 μ mol/mL,4℃保存。
FC 的提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(10 4 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建
议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 2 秒,间隔 3
秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3.血清(浆)样品:直接测定。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 500 nm,蒸馏水调零。
2. FC 工作液在 40℃水浴中预热 30min。
3. 标准管:依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 250μL FC 标准液和 750μL FC 工作液,混匀,静
置 24h 后于 500nm 测定 A 标准管。
4. 测定管:依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 250μL FC 待测液和 750μL FC 工作液,混匀,静
置 24h 后于 500nm 测定 A 测定管。
注意:标准管只需测定一次。
计算公式:
1. 血清(浆)中 FC 含量计算:
FC 含量(μmol /dL)= C 标准液×A 测定管÷A 标准管×100mL
=50×A 测定管÷A 标准管
C 标准液:0.5μmol/mL;100 mL:1dL=100 mL。
2. 组织中 FC 含量计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
FC 含量(μmol / mg prot)= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷Cpr
= 0.5×A 测定管÷A 标准管÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
FC 含量(μmol / g 鲜重)= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷W
= 0.5×A 测定管÷A 标准管÷W
C 标准液:0.5μmol/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g/mL
3. 细胞、细菌中 FC 含量计算:
FC 含量(μmol /10 4 cell)= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞(10 4 cell /L)
=0.5×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞(10 4 cell /L)
C 标准液:0.5μmol/mL。
 

 
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