海藻糖含量试剂盒说明书 分光光度法 50 管/48 样 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： 海藻糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。由于海藻糖具有*的不同于其他碳 水化合物的生物学特性，能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下 保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。 测定原理： 蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿﹑研钵、浓硫酸（不允许快递） 和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 提取液：液体 50ml×1 瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存； 海藻糖提取： 1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液）， 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次），室 温静置 45min，振荡 3~5 次，冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清。 2、组织的处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），冰浴匀浆，室温静置 45min，振荡 3~5 次，冷却后，8000g，25℃ 离心 10min，取上清。 3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建 议取 0.1mL 血清（浆）加入 1mL 提取液），冰浴匀浆，室温静置 45min，振荡 3~5 次，冷却 后，8000g，25℃离心 10min，取上清。 测定步骤： 1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。 2、 调节水浴锅至 95 度。 3、工作液的配制：临用前在试剂一中加入 7.5mL 蒸馏水后，缓慢加入 42.5mL 浓硫酸，不 断搅拌，充分溶解，待用；用不完的试剂 4℃保存一周； 4、样本测定：取 0.25mL 样本和 1mL 工作液至 EP 管中，95 度水浴 10 min（盖紧，防止水 分散失），自然冷却至室温，在 620 nm 波长下记录测定吸光度值 A。 注意：由于工作液具有强腐蚀性，请谨慎操作。 若吸光值大于1，请将样本用提取液稀释后再测定，计算公式中乘以相应的稀释倍数。海藻糖含量计算： 1、标准条件下测定回归方程为 y = 8.8976x+0.0729；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。 2、按样本鲜重计算： 海藻糖含量(mg/g 鲜重)= [V1×(A -0.0729)÷8.8976]÷(W×V1÷V2)=0.112×(A -0.0729) ÷W。 3、按样本蛋白浓度计算： 海藻糖含量(mg/mg prot)=[ V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(V1×Cpr)=0.112×(A -0.0729) ÷Cpr。 4、按细菌或细胞密度计算： 海藻糖含量(μg/104 cell)=[1000×V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(500×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729) 5、血清（浆）海藻糖含量计算 海藻糖含量（mg/mL）＝[V1×(A -0.0729）÷8.8976 )]÷(V3×V1÷V2)=1.12×(A -0.0729) 1000：1mg/mL=1000µg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V2：加入提取液总 体积 1mL；V3：加入血清（浆体积），0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质 量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。 注意：zui低检测限为 10μg/g 鲜重或 0.1μg/ mg prot | 
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