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小鼠免疫组化组织切片的实验
发布时间:2016-06-20   点击次数:607次

南京信帆生物专业提供免疫组化代测服务,有专业的生物科研实验室,采用原装试剂,结果准确,速度快,欢迎广大老师和学生前来咨询!

材料 二甲苯,酒精(100%,95%),EDTA抗原修复工作液(pH8.0,稀释50倍使用),0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4(稀释10倍使用), DAB显色液(临用前配制:试剂盒A、B、C各50ul,于1ml水中混匀)。

 方法 

1. 石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜

2. 二甲苯中脱蜡,梯度酒精入水(无水乙醇,95%酒精),浸泡蒸馏水中待用

3. 抗原修复 取500mlEDTA抗原修复工作液于1000ml烧杯中,在小功率电炉上加热,至似沸微沸(为了防止脱片)。将组织切片缓慢放入烧杯。继续加热,保持液体在微沸状态20分钟。将烧杯移开火源,室温下自然冷却后取出切片,蒸馏水洗1次3分钟,TBS洗2次每次3分钟。

4. 每张切片加一滴或50ul 3%过氧化氢溶液,室温下孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶的活性。 TBS冲洗3次,每次3min。

5. 除去TBS液,加一滴或50ul 一抗(灭活PLB免疫小鼠所得到的多抗,1:3000稀释),阴性对照采用普通血清,室温下孵育2小时,或4℃过夜。

6. TBS洗3次,每次5min,除去TBS液,每张切片加一滴或50ul polymer enhancer(试剂A),室温下孵育20min,TBS冲洗3次,每次3min。

7. 除去TBS液,每张切片加一滴或50ul 过氧化物酶标记的抗鼠/兔聚合物(试剂B),室温下孵育30min,TBS洗3次,每次3min。

8. 除去TBS液,每张切片加一滴或50ul 新鲜配制的DAB,显色3-10min。

9. 自来水冲洗,苏木素复染10min,水冲洗。0.1%的盐酸分化,自来水冲洗,TBS返蓝。 10. 不需脱水,直接用中性树脂封片。

 注意事项 1.抗原修复时必须保证切片始终能浸泡在液体内,一定要等工作液冷却后才能将切片取出

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