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一氧化氮(NO)测试盒,现货促销,欢迎抢购
发布时间:2016-07-15   点击次数:786次

一氧化氮(NO)测试盒,现货促销,欢迎抢购!                                                         

  • 测定意义和原理

一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子),在生物体内作为一种反应性极强的自由基,兼有信使和神经递质作用,同时又是一种效应分子,在体内具有广泛的shen作用,如松弛血管平滑肌,抑制血小板聚集,调节脑血流,介导细胞毒效应和免疫调节,参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。NO产生异常于某些疾病的发生有着密切关系。

 

NO本身半衰期极短,血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐及亚硝酸盐的形式存在,通过其浓度可以间接测得NO的浓度。

NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐,后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物,通过检测可得知NO 浓度。

 

  • 试剂组成及配置(96T)

 

试剂组成

保存及有效期

备注

试剂一,20mlx1瓶

4°C保存一年

 

试剂二,10mlx1瓶

4°C保存一年

 

试剂三,10mlx1瓶

4°C避光保存

过饱和溶液,如果结晶析出,60°C以上加热溶解完全以后使用

试剂四,3mlx1瓶

4°C避光保存

 

试剂五,3mlx1瓶

4°C保存

 

2mmol/L亚硝酸钠标准液,1mlx1支

4°C保存

 

 

显色剂的配置: 试剂三:试剂四:试剂五=2.5:1:1,现用现配,配好的显色剂放冰箱保存,颜色变得很深后不可使用

 

20umol/L亚硝酸钠标准液配置:取2mmol/L亚硝酸钠标准液0.1ml加双蒸水定容到10ml即为20umol/L 亚硝酸钠标准液,现用现配。

  • 操作过程
  • 前处理

血清(血浆):取血清(血浆)原液100ul加试剂一200ul,混匀,加试剂二100ul,漩涡充分混匀后静置10分钟,3500-4000转/分钟,离心15分钟,取上清160ul操作。

组织:取10%匀浆上清300ul加试剂一200ul,混匀,加试剂二100ul,漩涡充分混匀后静置10分钟,3500-4000转/分钟,离心15分钟,取上清160ul操作。

  • 操作表:

 

空白孔

标准孔

测定孔

双蒸水

160ul

 

 

20umol/L亚硝酸钠标准液

 

160ul

 

上清液

 

 

160ul

显色剂

80ul

80ul

80ul

  混匀,静置15分钟,波长550nm,用酶标仪测定各孔吸光度OD值。

  • 计算公式
  • 血清(血浆):
  • 组织:
  • 计算举例

    A. 取血清0.1ml,按照测定要求所示,进行操作,所得空白孔吸光度为0.0406,标准孔为0.4117,测定孔吸光度0.0795,计算如下:

NO含量=  (0.0795-0.0406)÷(0.4117-0.0406)X20X4=8.38 umol/L

B. 取10%组织匀浆上清,按照测定所示要求,进行操作,所得空白孔吸光度为0.0406,标准孔吸光度为0.4117,测定孔吸光度0.0543,同时测得组织匀浆上清中总蛋白浓度为11.6574gprot/L,计算如下:

NO含量= (0.0543-0.0406) ÷(0.4117-0.0406)x20x2÷11.6574=0.127umol/gprot

  • 标准曲线的制备:  用双蒸水将2mmol/L亚硝酸钠标准溶液进行1:39, 1:79, 1:99, 1:159, 1:319, 1:639稀释.即亚硝酸钠标准液浓度依次为: 50umol/L, 25umol/L, 20umol/L, 12.5umol/L, 6.25umol/L,3.125umol/L
  • 注意事项:
  • 严格按照操作规程
  • 离心后的上层液一定要澄清,若有浑浊要再次离心
  • 溶血及浑浊血清对测定结果有影响
  • 培养液的测定参照血清(血浆)的操作及计算
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