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信帆生物教你如何在实验室里用小技巧提高工作效率!
发布时间:2017-03-10   点击次数:521次

信帆生物教你如何在实验室里用小技巧提高工作效率!

1 跑 page 胶的时候,小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会 比大电压泳道跑的直一些,且分离效果更高,有利于分子量相差不大的蛋白分离。

2. 提取质粒的时候,zui后一步的酒精挥发很关键,基本上是其后续的酶切反应的决定性因 素。 所以这一步尽量挥发长一点时间, 是空调吹热风, 或是 37 度温箱放长一点的时间, 我试过室温过夜,酶切很好。

 3. 做 WESTERN BLOT 的时候,大家往往会摸索一抗、二抗的浓度,封闭时间,曝光时间 等等,而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜,甚至重新提蛋白,这样会浪费大量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后,将 PVDF 膜晾干,裁减成小块,保存起 来,用的时候取出一块,没有任何影响。这对于摸索条件的战友来说,节约了大量的时间。

4. 有关缓冲液和培养基配置  1)将缓冲液配方中的成分分别以 10-100 倍配成母液储存,需要的时候只需将相应的母液 混合,补加水稀释即可  2)配培养基时通常会忘记各成分的量,如配 LB 时的三个成分不记得到底哪个是 5g,哪个 要 10 个,因此可以在常用的试剂瓶的标签上注明所需的量,如配 LB 时,在NaCl 瓶外注明 10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等,很方便,不需要每次配之前临时翻书

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5. 有关 PCR主反应液配置:  在做克隆鉴定的时候经常需要在酶切鉴定前进行 PCR 鉴定,每次配置 PCR 反应液很繁琐, 可以将其配置类似 kit 的形式,按你需要的反应体系列表,然后放大 100 倍配置 100×主反应 液(100 次反应),其中含 buffer,Mg2+,dNTPs,但不含引物和 Taq 酶,然后可以 10×分 装或一管储存在-20度,在需要的时候拿出融开,然后按所需的 PCR 反应个数吸取相应的 倍数,再补加相应反应倍数的 Taq 和引物,混匀后分装,这样做的好处如下: 1)可极大的节省宝贵的时间,可早点收工,看球 2)避免每次反应加样不均的可能 3)大大减少 PCR 假阳性的产生

6. 有关酶切反应液的配置:  在做酶切时,也可以象 PCR 一样配置主反应液,每次反应前先列好反应的体系,算好需要 的反应数,然后按所需反应的体系按所需反应数放大,加入 buffer、酶、水,质粒栏空缺, 然后混合后按除质粒 DNA 的体积分装,然后再在每管中加入相应体积的质粒 DNA 酶切, 这样做的好处如下,特别是当同时有 10几个阳性克隆需要鉴定时尤为明显。

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