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如何操作人Ⅲ型胶原(PⅢP)elisa试剂盒
发布时间:2017-05-13   点击次数:472次

人Ⅲ型胶原(PⅢP)elisa试剂盒基本信息

Ⅲ型胶原蛋白,PⅢP,Ⅲ型前胶原经氨基端内切肽酶。

中文名 Ⅲ型胶原蛋白

正常值 0.6μg/ml

简    称 PⅢP

作用酶 Ⅲ型前胶原经氨基端内切肽酶

1979年国外已建立测定血清PⅢP的放射免疫法(RIA),并证实肝纤维化时血清PⅢP含量与肝炎症,坏死和肝纤维化有关,但以肝纤维化相关为主,因此血清PⅢP仍然是肝纤维化的重要标记物。PⅢP对于诊断儿童肝疾病没有意义,它随儿童年龄的增长有所升高。许多学者报道,血清PⅢP是反应成人肝纤维化活动的良好指标,可弥补肝活检不能动态观察等不足。肝硬化患者明显升高,但在肝硬化晚期,因Ⅲ型前胶原肽合成率降低,血清中PⅢP反而低于早期。PⅢP在区别慢性活动性肝炎与慢性迁延性肝炎有良好的帮助,慢性肝PⅢP水平明显升高,而在慢迁肝其含量与正常人无明显差别。

人Ⅲ型胶原(PⅢP)elisa试剂盒如何操作

    1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。

  2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

  3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

  4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

  5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

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