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大鼠前列腺素E2使用说明,PGE2检测试剂盒
发布时间:2018-01-09   点击次数:319次

大鼠前列腺素E2使用说明,PGE2检测试剂盒                       

大鼠前列腺素E2使用说明,PGE2检测试剂盒的样本实验准备

在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。

液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

  • 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  • 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
  • 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
  • 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
  • 培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  • 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂,用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
  • 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
  • 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中前列腺素E2(PGE2)含量。

大鼠前列腺素E2使用说明,PGE2检测试剂盒实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠前列腺素E2(PGE2)水平。用纯化的大鼠前列腺素E2(PGE2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入前列腺素E2(PGE2),再与 HRP 标记的前列腺素E2(PGE2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的前列腺素E2(PGE2)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠前列腺素E2(PGE2)浓度。

 

 试剂盒组成

试剂盒组成

48T

96T

保存

说明书

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1个

1个

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品960ng/L

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20倍)20ml×1瓶

(30倍)20ml×1瓶

2-8℃保存

 

操作步骤

  • 标准提供户可管中行稀 释。

480ng/L

5 号标准品

150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

240ng/L

4 号标准品

150µl  5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

120ng/L

3 号标准品

150µl  4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

60ng/L

2 号标准品

150µl  3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

30ng/L

1 号标准品

150µl  2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

 

  • 加样白对孔、待测被板 50µl测样 40µl, 然后 10µl样品zui 5 加样,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  • 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
  • 配液:将 20倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用
  • 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

    重复 5 次,拍干。

  • 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
  • 温育:操作同 3
  • 洗涤:操作同 5
  • 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.
  • 终止终止 50µl,终转黄
  • 测定450nm 波长依OD  加终止液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD  值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线线样品 OD 方程再乘即为样品的实际浓度。

                      

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD  大于 OD 释液稀释n 测定计 算时zui×5

5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

 

检测范围

15ng/L – 480ng/L

 

保存条件及有效期

12-8

2.有效期:6 个月

 

 

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