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带您体验人硫氧还蛋白还原酶(TrxR)ELISA试剂盒的实验
发布时间:2018-03-28   点击次数:350次

带您体验人硫氧还蛋白还原酶(TrxR)ELISA试剂盒的实验

硫氧还蛋白还原酶是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员。硫氧还蛋白还原酶 thioredoxin reductase和硫氧还蛋白、NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统.TrxR有很多生物学功能,与人类某些疾病的发病机制也密切相关。

由还原型 NADP催化硫氧还蛋白还原的酶。EC1.6.4.5.。含有一个分子的FAD。使氧化型硫氧还蛋白的胱氨酸残基还原,变成一对半胱氨酸残基,后者进一步成为核糖核苷酸还原的电子供体。它存在于大肠杆菌、酵母、肝脏以及肿瘤细胞中。 

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人硫氧还蛋白还原酶(TrxR)水平。用纯化的人硫氧还蛋白还原酶(TrxR)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入硫氧还蛋白还原酶(TrxR),再与HRP 标记的硫氧还蛋白还原酶(TrxR)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的硫氧还蛋白还原酶(TrxR)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人硫氧还蛋白还原酶(TrxR)浓度。

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实验中需要注意:

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

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