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信帆生物-酵母转化试剂盒酵母感受态细胞的制备
发布时间:2020-05-11   点击次数:225次

信帆生物-酵母转化试剂盒酵母感受态细胞的制备

 

酵母感受态细胞的制备:

1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基(YPDA加20g Agar/L)上划线,在30℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的duan线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。

3.首先把酵母细胞接种到3 ml液体YPDA培养基中,30℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞,1000 g,离心5 min, 去上清。

5.沉淀用30-50 ml的无菌的去离子水悬浮。1000 g,离心5 min,去上清。

6.沉淀用合适体积的100 mM LiAc悬浮(30 ml的酵母菌zui多用不超过1 ml的100 mM LiAc悬浮,通常100 μl的酵母细胞用于转化一个质粒,即一个反应)。

7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5 ml的离心管中,每管分装100 μl,用于转化一个质粒即一个反应。1000 g,离心5 min,去上清。制备好的感受态细胞备用。

 

注意事项:

1. 初次使用Carrier DNA,请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。

2. PEG溶液在低温环境下会析出,请于常温环境下完全溶解后使用。

3. 转化全程要无菌操作。

 

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ELISA试剂盒:进口ELISA试剂盒,国产ELISA试剂盒,人elisa试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒等。
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标准品对照品:进口对照品,进口对照药材,进口标准品.
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