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甘油检测试剂盒液体,组织样本都可以检测
发布时间:2021-01-04   点击次数:172次

甘油检测试剂盒液体,组织样本都可以检测

 

 

描述:甘油是甘油三酯的水解产物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯;胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯;激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪细胞中的甘油三酯。与游离脂肪酸一样,甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标,但检测更方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法和经典GPO-Trinder酶学反应相结合的方法,通过比色法测定液体样本中的甘油含量。经过优化后,操作步骤更加简单,可靠性和重复性俱佳,适合生物医学、食品实验室检测。

 

 

 

原理:ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化为3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢;在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺,其光密度值与甘油浓度成正比。

 

适用范围:测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘油浓度。

 

组成   

R1试剂 40 ml

R2试剂 10 ml     

4 mmol/L甘油标准品1 ml

4 ºC,储存3个月。

 

一所需设备:酶标仪、生化分析仪或721722型可见光分光光度计。工作波长550nm,如无此波长建议优先选用570nm、次选530490nm

 

 

 

 工作溶液配制:4:1比例,取4 ml试剂R11 ml试剂R2混合,立即使用或4ºC保存<1天,变色弃去。

 

 标准品稀释:用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将4 mM甘油标准品倍比稀释为100050025012562.531.2515.6257.8125 µmol/L,通常取其中4~6管即可,注意设置0浓度对照反应管

 

 甘油浓度测定:

参见下表进行加样。为使反应时间尽量一致,减小实验误差,可先加入标准品、待测样品,然后再加入工作溶液。(注意:当甘油浓度较低时,可将待测样品与工作溶液按照100µl:100µl体积混合,然后再进行测定,但是如果样品体积超过100µl时将会稀释工作液中酶的浓度,使反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过线性范围,可进行适当稀释,然后根据稀释倍数来计算样品中甘油浓度。)

37ºC25ºC反应 10分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。

先用蒸馏水+工作液的空白管调零,然后测定各管OD值。

绘制标准曲线并计算甘油浓度。

Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴,标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式--R2-

 

 

说明:

1、维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、二硫苏糖醇、巯基乙醇、高浓度EDTA干扰测试。

2正常血清甘油浓度为20-130µmol/L,细胞培养时须用不含酚红的无色无血清培养基,如果培养基中含有酚红,可以选择含有酚红的无细胞培养基作为对照进行测定

 

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