组织总磷含量检测试剂盒案例操作

产品说明： 磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代 谢、蛋白质化和脱化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供 依据。总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与根生成660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含量，进而可计算出组织中总磷含量。

技术指标：
咀低检出限：0.0585 mmol/L
线性范围：0.0625-2 mmol/L
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。 

操作步骤： 

一、有机磷消化（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 称取约 0.1 g 组织于带盖试管中，加浓硫酸 1.0 mL，盖紧（封口膜封口，防止水分散失）后沸水浴 10min 左 右，待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一 200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水浴，直到溶液呈透明状， 取出室温冷却后，加蒸馏水 3.8 mL，充分混匀；室温，10000rpm，离心 10min，取上清液，待测。

注意事项： 

1、试剂三需临用前配制，限当天使用。 

2、测定前先用 1~2 个样本做预实验，如吸光值大于 0.8 时，需用蒸馏水做相应稀释。

实验实例： 1、 取 0.1g 肾脏按照提取步骤操作，离心取上清之后按照测定步骤操作，测得计算 A 测定=0.273，A 空白=0.016， A 标准=0.429，按样本质量计算总磷含量得： 总磷含量(mmol/g 质量)= 0.005×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 质量。 2、 取 0.1g 脾按照提取步骤操作，离心取上清之后按照测定步骤操作，测得计算 A 测定=0.268，A 空白=0.016，A 标准=0.429，按样本质量计算总磷含量得： 总磷含量(mmol/g 质量)= 0.005×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 质量。