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组织总磷含量检测试剂盒案例操作
发布时间:2021-10-12   点击次数:54次

组织总磷含量检测试剂盒案例操作


产品说明: 磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根,参与生物体内多种代谢,包括能量代谢、核酸代 谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率,进而为合理施肥提供 依据。总磷经消化后,转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法,一定条件下,钼蓝与磷酸根生成660nm 有特征吸收峰的物质,通过测定660nm光吸收,即可计算无机磷含量,进而可计算出组织中总磷含量。


技术指标:
咀低检出限:0.0585 mmol/L
线性范围:0.0625-2 mmol/L
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。 


操作步骤: 

一、有机磷消化(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 称取约 0.1 g 组织于带盖试管中,加浓硫酸 1.0 mL,盖紧(封口膜封口,防止水分散失)后沸水浴 10min 左 右,待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后,加试剂一 200μL,充分混匀,盖紧后继续沸水浴,直到溶液呈透明状, 取出室温冷却后,加蒸馏水 3.8 mL,充分混匀;室温,10000rpm,离心 10min,取上清液,待测。


注意事项: 

1、试剂三需临用前配制,限当天使用。 

2、测定前先用 1~2 个样本做预实验,如吸光值大于 0.8 时,需用蒸馏水做相应稀释。


实验实例: 1、 取 0.1g 肾脏按照提取步骤操作,离心取上清之后按照测定步骤操作,测得计算 A 测定=0.273,A 空白=0.016, A 标准=0.429,按样本质量计算总磷含量得: 总磷含量(mmol/g 质量)= 0.005×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 质量。 2、 取 0.1g 脾按照提取步骤操作,离心取上清之后按照测定步骤操作,测得计算 A 测定=0.268,A 空白=0.016,A 标准=0.429,按样本质量计算总磷含量得: 总磷含量(mmol/g 质量)= 0.005×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 质量。

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