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CCK-8 试剂盒,为 MTT 法的替代方法
发布时间:2022-06-27   点击次数:153次

CCK-8 试剂盒,为 MTT 法的替代方法


产品简介:

Cell Counting Kit-8 简称 CCK-8 试剂盒,为 MTT 法的替代方法,是一种基于 WST(水溶性四唑盐,化学名:

2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速

高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验

使用说明: 一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时) 1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做 3-5 个细胞浓度梯度,每组 3-6 个复孔。

3、接种后培养至细胞贴壁,然后加 CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值,制作出一条以细胞数量为横坐

标(X 轴),OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标

准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8 后的培养时间。)

二、细胞活性检测 1、在 96 孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在 37℃,5% CO2的条件下)。

2、向每孔加入 10μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。

4、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。

5、如果暂时不测定 OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,

并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增值-毒性检测 1、在 96 孔板中配置 100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时(在 37 ℃,5% CO2 的条件下)。

2、向培养板加入 10μL 不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24 或 48 小时)。

3、向每孔加入 10 μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数)。如果待测物质有

氧化性或还原性的话,可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入

新的培养基),去掉药物影响。

4、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。

5、用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

6、如果暂时不测定 OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶

液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。


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