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细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒适用于哪些实验
发布时间:2022-07-01   点击次数:67次

细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒适用于哪些实验


细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒(Calcein AM,PI法,适用于FACS、FM) 通过同时检测细胞内酯酶活性和质膜完整性,提供一种判断细胞活力的荧光染色方法。

本试剂盒内含有两种染料:钙黄绿素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙啶 (PI),Calcein-AM可透过活细胞膜,通过活细胞内的酯酶作用由几乎无荧光的Calcein-AM脱去AM基团生成具有强烈荧光信号的绿色荧光物质Calcein(Ex/Em:495nm/515nm),因此活细胞可被检测到绿色荧光。另一方面PI不能透过活细胞的细胞膜,但当细胞膜受损时PI可进入到死细胞内并与核酸结合,产生明亮的红色荧光(Ex/Em:535nm/617nm),因此死细胞会被检测到红色荧光。用490nm激发时可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞;而用545nm激发时仅可观察到死细胞。

本试剂盒适用于荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等荧光检测系统。本试剂盒可以应用于大多数的真核哺乳动物细胞,但不适用于细菌和真菌。


产品应用实测:

细胞:Hela;

凋亡处理:Apoptosis Activator 2

检测工作浓度:2 µM calcein AM, 8 µM PI;

孵育时间:40 min;

检测条件:荧光显微镜,200×。

结果:活细胞细胞质成绿色荧光,死细胞细胞核呈红色荧光,颜色鲜明。


注意事项:

1. 本试剂盒中的Calcein-AM Solution和PI Solution量很少,有可能会粘在盖子或管壁上,开封前请先适当离心至管底。

2. 由于Calcein-AM储存液对湿度非常敏感,请在每次使用后紧紧密封Calcein-AM储存液的盖子。如果不能一次用完,建议根据单次用量分装密封保存。例如分装成10μl/管,用封口膜封口,并用铝箔纸包裹,放在一个密闭性能好的塑料袋中,并放入一包干燥剂,在-20℃密封避光保存。

3. 染色工作液必须现配现用,配制好的工作液请在当天使用。

4. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用本试剂盒的过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。建议染色后尽量当天完成检测。

5. 碘化丙啶对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。

6. 为了您的安全和健康,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。




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