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​Western一抗二抗去除液的作用
发布时间:2022-11-09   点击次数:118次

Western一抗二抗去除液的作用


Western一抗二抗去除液,用于Western Blot 中转印了蛋白的膜的重复利用。在Western Blot中完成了一 抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测 Actin、Tubulin 等内参蛋白或检测其它蛋白进行比较。通过使用Western一抗二抗去除液,充分去除一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白,与重新跑SDS-PAGE胶相比,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。


Western一抗二抗去除液可变性已经结合的抗体,使其失活,从而将同一张膜再用于其它抗体的杂交。与其它类型的一抗二抗去除液相比,该试剂不破坏抗原,处理过程中膜上抗原不丢失,因此可重复应用的次数更多、灵敏度更高。主要特征

 操作简单快速对抗原蛋白作用温和,不会造成抗原蛋白的损转印膜至少可重复使用3~5次


 应用

 蛋白印记杂交膜(PVDF膜和NC膜)的再利用。 


储存

 4°C保存,有效期1年。 


蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。


与Southern Blot或Northern Blot杂交方法类似,但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针"是抗体,“显色"用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。


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