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2022产品更新-Poly(A)聚合酶
发布时间:2022-12-27   点击次数:55次

2022产品更新-Poly(A)聚合酶


描述:本E. coli Poly(A) Polymerase 为高效加A 聚合酶,该酶以RNA为模板在RNA的3′末端加入20~200 个A碱基。可应用于增强mRNA 的稳定性,及microRNA 加A 尾,为cDNA 合成提供oligo-dT 引物结合位点等。该酶以单链RNA作为引物,ATP 作为底物进行聚合反应。




操作方法:
1. 按以下组分配制反应体系
E. coli Poly(A) Polymerase(5U/μl)    1 μl
10×EPAP Reaction Buffer    2 μl
10 mM ATP    2 μl
25 mM MnCl2    2 μl
RNA    0.5~10 μg
ddH2O    Up to 20 μl

2. 混合均匀后,37°C 反应1 小时。即可用于后续实验。
注:不同的实验需要加A 的量会有所不同,可通过减少反应时间来调整加A 的长度,该酶在37°C 反应30 分钟时可加30 个A 碱基,1 小时可加100 个A 碱基。

活性定义:
在37℃、pH7.9 的条件下,以ATP 为底物,10 分钟内把1 nmol 的AMP 聚合到RNA 上所需要的酶量定义为1 个活性单位(U)。


应用:
♦ RNA 3' 标记
♦ microRNA 加A 尾,为cDNA 合成提供oligo-dT 引物结
合位点
♦ 增强RNA 稳定性
储存:
-20°C 可保存2 年。


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