人基质金属蛋白酶14（MMP-14）elisa试剂盒检测方法和原理！

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人基质金属蛋白酶14（MMP-14）水平。用纯化

的人基质金属蛋白酶14（MMP-14）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中

依次加入基质金属蛋白酶14（MMP-14），再与HRP 标记的基质金属蛋白酶14（MMP-14）

抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻-底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在

HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的

基质金属蛋白酶14（MMP-14）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），

通过标准曲线计算样品中人基质金属蛋白酶14（MMP-14）活性浓度。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

800U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

400U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

200U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

100U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

50U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，

然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此

重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止

液后15 分钟以内进行。

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