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人基质金属蛋白酶14(MMP-14)elisa试剂盒检测方法和原理
更新时间:2023-06-27   点击次数:235次

人基质金属蛋白酶14(MMP-14)elisa试剂盒检测方法和原理!


实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人基质金属蛋白酶14(MMP-14)水平。用纯化

的人基质金属蛋白酶14(MMP-14)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中

依次加入基质金属蛋白酶14(MMP-14),再与HRP 标记的基质金属蛋白酶14(MMP-14)

抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻-底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在

HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的

基质金属蛋白酶14(MMP-14)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),

通过标准曲线计算样品中人基质金属蛋白酶14(MMP-14)活性浓度。


操作步骤

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

800U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

400U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

200U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

100U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

50U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,

然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此

重复5 次,拍干。


6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止

液后15 分钟以内进行。


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