新闻中心您的位置:网站首页 >新闻中心 >叶绿素(Chlorophyll)检测试剂盒(微板法)的计算
叶绿素(Chlorophyll)检测试剂盒(微板法)的计算
更新时间:2023-12-20   点击次数:69次

 叶绿素(Chlorophyll)检测试剂盒(微板法)的计算

产品简介:

叶绿体是光合作用的细胞器,在光合作用研究中,常需要用提取的叶绿体展开下游研究工作,叶绿体中所含的色素主要有两大类,叶绿素(包括叶绿素 a 和叶绿素 b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素),它们与类囊体膜上的蛋白质结合,成为色素蛋白复合体,其中叶绿素又称叶绿体色素(Chlorophyll)。叶绿素(Chlorophyll)检测试剂盒(微板法)检测原理是叶绿素不溶解于水,而溶于有机溶剂,以有机溶剂提取叶绿素,根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的吸光度(A)与其中溶质浓度(C)和液层厚度(L)成正比,即 A=αCL,其中α为比例常数,当溶液浓度以百分比浓度为单位,层液厚度为 1cm 时,α为该物质的吸光系数,在该试剂盒情况下叶绿素 a 和叶绿素 b 在 665nm、649nm 处有最大吸收波,根据经验公式可计算出叶绿素 a、叶绿素 b及总叶绿素含量,主要用于植物组织中叶绿素的提取以及定量检测叶绿素 a、叶绿素 b 及总叶绿素含量。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。 

操作步骤(仅供参考)

1、叶绿素提取:

①取菠菜或其他植物新鲜叶片,洗净,擦干,去中脉,称取剪碎的新鲜样品 0.1g,置于研钵或匀浆器,加入少量提取粉剂(约 50mg)和 1ml Chlorophyll Assay Buffer,研磨或匀浆成液态。

②将研磨液或匀浆液转移至 10ml 离心管,用少量 Chlorophyll Assay Buffer 冲洗研钵 或匀浆器数次,最后连残渣一同倒入 10ml 离心管,补加 Chlorophyll Assay Buffer 至

10ml,混匀,避光放置 5min~2h。注:也可将组织剪碎,加入 Chlorophyll Assay Buffer,

避光放置 12~36h,期间晃动数次,使组织与提取试剂充分接触,当组织接近白色,即表示色素提取完成,如果仍有较多组织颜色,应继续浸提至组织残渣颜色接近于白色。

2、滤纸或三层纱布过滤,留取滤液,也可采用 4000r/min 离心 5min,取上清液待测。

3、测定:酶标仪开机预热 30min 以上,调节多波长至 665nm 和 649nm;取叶绿素提取液 200μl 加入 96 孔板中,以 Chlorophyll Assay Buffer 调零,分别用酶标仪测定提取液在 665nm、649nm 处吸光度(A665A649)。

计算:

叶绿素 a 含量(mg/g)=Ca×V×N/(W×1000)

叶绿素 b 含量(mg/g)=Cb×V×N/(W×1000)

总叶绿素含量(mg/g)=CT×V×N/(W×1000)

式中:Ca=(13.95×A665-6.88×A649)/0.6=23.25×A665-11.467×A649 (mg/L)

Cb=(24.96×A649-7.32×A665)/0.6=41.6×A649-12.2×A665 (mg/L)

CT=(6.63×A665+18.08×A649)/0.6=11.05×A665+30.133×A649 (mg/L)

V=叶绿素提取液体积(ml)=10(ml)

N=稀释倍数

W=样品鲜重或干重(g)

1000=ml 与 L 的单位换算

0.6=200μl 提取液在酶标板中的光径(cm)

注意事项:

1、 为了避免叶绿素见光分解,操作时应尽量避光,研磨或匀浆时应尽量缩短时间。

2、 当样品吸光值大于 1 时,可适当稀释后再进行测定,计算时乘以稀释倍数。

3、 Chlorophyll Assay Buffer 易挥发,不用时需拧紧瓶盖。

4、 叶绿素提取液不能出现浑浊现象,否则应重新过滤。

5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:12 个月有效。


 叶绿素(Chlorophyll)检测试剂盒(微板法)的计算 


网站首页 关于我们 新闻中心 产品中心 联系我们
备案号:苏ICP备16008122号-3   GoogleSitemap   技术支持:环保在线 管理登陆
© 2018 南京信帆生物技术有限公司(www.njxfbio.com) 版权所有 总访问量:465616