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双链DNA中和缓冲液

双链DNA中和缓冲液

产品时间:2022-04-29

简要描述:

双链DNA中和缓冲液:DNA 的双链是一个完整的基因纽带,在每个细胞核里都有一套,控制成长规律。(除了红血细胞之类的的细胞没有 DNA)单链仅仅在细胞复制时才会有。细胞复制的过程中,纽带将被打开,由复制体从蛋白材料中取材,复制成单链 DNA 的另一半。

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双链DNA中和缓冲液:DNA 的双链是一个完整的基因纽带,在每个细胞核里都有一套,控制成长规律。(除了红血细胞之类的的细胞没有 DNA)单链仅仅在细胞复制时才会有。细胞复制的过程中,纽带将被打开,由复制体从蛋白材料中取材,复制成单链 DNA 的另一半。


操作步骤(仅供参考):

1、 按实验具体要求操作。

2、或按如下步骤将凝胶置于变性溶液(碱性)中进行DNA 变性:

①转移到不带电荷的膜上:a 、将凝胶置于10倍凝胶体积的双链DNA 变性缓冲液中,室温放置45min ,并不断轻轻振荡。b 、用去离子水短暂浸泡凝胶,然后将凝胶浸没于10倍凝胶体积的DNA 中和缓冲液Ⅰ中,室温放置30min ,并轻轻振荡;更换一次DNA 中和缓冲液Ⅰ继续浸泡15min 。

②转移到带电荷的尼龙膜上:a 、将凝胶置于5-10倍凝胶体积的DNA 中和缓冲液Ⅱ中,室温放置15min ,并不断轻轻振荡。b 、更换一次DNA 中和缓冲液Ⅱ继续浸泡20min ,并不断轻轻振荡。

 

注意事项:

1、 如果目标片段的长度小于20kb ,最好避免进行脱嘌呤反应。

2、 如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。

缓冲溶液的配制和应用

为了配制一定pH的缓冲溶液,首先选定一个弱酸,它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值,然后计算酸与碱的浓度比,根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。

以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。

缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用广泛,如鉴定Mg2+ 离子时,可用下面的反应:

白色磷酸铵镁沉淀溶于酸,故反应需在碱性溶液中进行,但碱性太强,可能生成白色Mg(OH)2沉淀,所以反应的pH值需控制在一定范围内,因此利用NH3·H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液,保持溶液的pH值条件下,进行上述反应。


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