RIPA裂解液(组织/细胞)

RIPA裂解液(组织/细胞)

【产品规格】 ：20ml /100ml

【储存条件】 ：RIPA裂解液4℃保存，PMSF -20℃保存

【有效期】 ：12个月

【产品简介】 ：

RIPA裂解液是一种主要用于从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白的试剂。

RIPA 组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜（包括核膜）。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。

本产品仅供科研实验用，不做其它用途！

【使用说明】 ：

如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1mL RIPA加入10uL PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，混匀备用（PMSF现用现加）。

1、样品前处理：

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液，用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

【注意事项】 ：

本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠：此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可加入少量 SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。

如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。

RIPA裂解液(组织/细胞)