细胞铁离子检测试剂盒操作步骤

铁是一种化学元素，为晶体，它的化学符号是Fe ，原子序数是26，在化学元素周期表中位于第4周期、第VIII 族，是铁族元素的代表。是常用的金属。它是过渡金属的一种，是地壳含量第二高的金属元素。

原理： 

铁与蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁， 并与亚铁嗪生成紫红色化合物，在 540-580nm 处可比色测定。

适用范围：该试剂盒可用于培养细胞中铁离子定量检测。 

操作步骤： 

1. 样品准备（以 24 孔板为例）： 

将含铁元素 DMEM 培养过的细胞用冷的 PBS 2ml 洗两遍，将 PBS 吸弃（若不马上检测可将 其冻存于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解细胞，置于摇床裂解 2h。 

2. 标准品的稀释：用试剂盒提供的稀释用液将 3mM 的标准品母液稀释为：300 uM、150uM、 

75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置 0 浓度对照反应管。 

3. 将缓冲液与 4.5%KON溶液按 1:1 混匀，称为混液 A。 

4. 参考下表使用 1.5ml 离心管，设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元 素含量过高，用裂解液适当稀释后再进行测定。 

5. 混匀，60℃ 孵育 1h。 

6. 冷却至室温，将管盖与管壁上的液滴离心入管底。 

7. 加入 30ul 铁离子检测剂，混匀，室温孵育，30min。 

8. 取 200ul 于 96 孔板，在 550nm 测定吸光度。如果不能测定 550nm，也可以在 540nm~580nm 范围内检测。 

9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。