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细胞铁离子检测试剂盒操作步骤
更新时间:2022-05-11   点击次数:3780次

细胞铁离子检测试剂盒操作步骤


铁是一种化学元素,为晶体,它的化学符号是Fe ,原子序数是26,在化学元素周期表中位于第4周期、第VIII 族,是铁族元素的代表。是常用的金属。它是过渡金属的一种,是地壳含量第二高的金属元素。


原理: 

铁与蛋白结合成复合物,在酸性介质中铁从复合物中解离出来,再被还原剂还原成二价铁, 并与亚铁嗪生成紫红色化合物,在 540-580nm 处可比色测定。


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适用范围:该试剂盒可用于培养细胞中铁离子定量检测。 


操作步骤: 

1. 样品准备(以 24 孔板为例): 

将含铁元素 DMEM 培养过的细胞用冷的 PBS 2ml 洗两遍,将 PBS 吸弃(若不马上检测可将 其冻存于-20℃)。200ul/孔裂解液裂解细胞,置于摇床裂解 2h。 

2. 标准品的稀释:用试剂盒提供的稀释用液将 3mM 的标准品母液稀释为:300 uM、150uM、 

75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置 0 浓度对照反应管。 

3. 将缓冲液与 4.5%KON溶液按 1:1 混匀,称为混液 A。 

4. 参考下表使用 1.5ml 离心管,设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元 素含量过高,用裂解液适当稀释后再进行测定。 

5. 混匀,60℃ 孵育 1h。 

6. 冷却至室温,将管盖与管壁上的液滴离心入管底。 

7. 加入 30ul 铁离子检测剂,混匀,室温孵育,30min。 

8. 取 200ul 于 96 孔板,在 550nm 测定吸光度。如果不能测定 550nm,也可以在 540nm~580nm 范围内检测。 

9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。 



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