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嘌呤霉素盐酸盐用作蛋白质合成的抑制剂
发布时间:2022-05-25   点击次数:103次

嘌呤霉素盐酸盐用作蛋白质合成的抑制剂


嘌呤霉素对原核和真核生物的翻译过程均有干扰作用。嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC),赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。用作蛋白质合成的抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。


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用途及描述:科研试剂,广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面。嘌呤霉素(puromycin;PM ) 是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构, 能够同氨基酸结合,代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合,并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结合,但是不能参与随后的任何反应, 因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。由于嘌呤霉素对原核和真核生物的翻译过程均有干扰作用,故难于用做抗菌药物,主要用作研究蛋白质合成的生物化学工具。有人试用于肿瘤治疗。


细胞筛选步骤

1. 在哺乳动物细胞中进行细胞筛选前,应先进行浓度梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度即杀死所有宿主细胞的低浓度(一般哺乳动物细胞选用的有效浓度范围为1-15 μg/mL)。

2. 细胞转染48h后,换上加入了适宜浓度嘌呤霉素的新鲜培养基,然后放入细胞培养箱中培养。

3. 每隔3-4天换液,更换的培养基为含相同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基。

4. 筛选7天后,评估剩余存活细胞是否全部为转染成功克隆。另外,这些克隆的筛选时间主要依赖于宿主细胞系种类和转染筛选效率。

5. 筛选出的转染成功克隆用选择培养基培养7天,再进行后续实验。注意:需加抗生素筛选的细胞,应为生长状态良好的细胞。另外,如果细胞密度过大将会影响筛选效率,因此,接种细胞的汇合度应不超过25%。


储存条件:-20° C,避光防潮密闭干燥。 

运输条件:2~8℃运输




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