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丹磺酰氯可用于测定肽链的氨基末端
发布时间:2022-06-09   点击次数:82次

丹磺酰氯可用于测定肽链的氨基末端


丹磺酰氯是一种强荧光剂,可用于测定肽链的氨基末端,能专一地与肽链N端α-氨基反应生成丹磺酰-肽,后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光,可直接用电泳法或层析法鉴定出N-端是何种氨基酸。丹磺酰氯是用于标记蛋白质和氨基酸的荧光试剂。


T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)-9.6.jpg

产品参数

别名: 丹酰氯,二甲氨基萘磺酰氯,Dansyl Chloride ,DNSCl,5-(Dimethylamino)-1-naphthalenesulfonyl chloride, 

性状:   橙黄色粉末

CAS号: 605-65-2

分子式: C12H12CINO2S

分子量: 269.74

纯度:   >98%

溶解性: 溶于丙酮

保存:2-8℃干燥。


丹磺酰氯高效液相色谱仪测氨基酸实验 

原理:蛋白质样品经酸或碱水解后再行用丹磺酰氯进行衍生蛋白质样品经酸或碱水解后再行用丹磺酰氯进行衍生化作用溶解于流动相溶液,用具有C8反相柱荧光检化作用溶解于流动相溶液,用具有C8反相柱荧光检测器的反相液相色谱进行测定,能很好地测定出各种测器的反相液相色谱进行测定,能很好地测定出各种氨基酸的含量。 

实验步骤 

1、样品处理与测定 

(1)蛋白质的水解:称取1毫克的蛋白质样品或相当于1毫克蛋白质的样品于玻璃管中,加入1毫升 6mol/L盐酸后用磨口封口或烧结封口,移入110℃恒温箱中加热16小时,取出冷却。用微量注射器取20微升水解样液于小玻璃管中,加入10微升正亮氨-酸作为内标溶液,并在水浴中蒸发干燥。 

(2)衍生物制备及其测定:将上述干燥制备的样品加入40微升 pH=10.5 缓冲溶液,接着加入100 微升丹磺酰氯工作试剂,紧密封住管口,充分振摇15分钟,将样品管在100℃ 水浴中加热2分钟,取出冷却。吸取1毫升以1:1的比例相混合的甲、乙两种流动相的混合溶液于样品管中,充分振摇15秒,吸取10微升左右的此样品溶液注入液相色谱柱内,记录色谱图。 

2、校正因子fi的确定用微量注射器吸取氨基酸标准混合溶液20微升于小玻璃管中,加入10微升正亮氨-酸作为内标溶液,并在水浴中蒸发干燥,然后按样品处理中的方法制备标准氨基酸的衍生物,再加入1毫升流动相混合溶液,用微量注射器吸取5-10微升经衍生化的氨基酸溶液进入色谱仪,记录色谱图,并确定各氨基酸的出峰保留时间和峰面积,以及测量内标物和各氨基酸的峰面积,并求出各氨基酸校正因子fi。

丹磺酰化法分析蛋白质 N-末端氨基酸实验 

原理:蛋白质的α-氨基与丹磺酰氯(DNS-Cl 是一种荧光物质) 反应, 生成DNS-蛋白质, 经水解可生成DNS-氨基酸。通过聚酰胺薄膜层析分析DNS-氨基酸, 可确定蛋白质的N-末端氨基酸。此法灵敏度高, 也可用于蛋白质的氨基酸组成的测定。聚酰胺对极性物质的吸附作用是: 它能和被吸附物质间形成氢键, 这种氢键的强弱决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离物在聚酰胺表面发生吸附、解吸附、再吸附和再解吸附的连续过程, 就能导致分离物达到分离的目的。


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