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DAPI染色原理及使用说明
更新时间:2023-08-10   点击次数:2060次

 DAPI染色原理及使用说明

DAPI 是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处,一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNADAPI分子的荧光强度提高大约20倍,常用与荧光显微镜观测,根据荧光的强度可以确定DNA的量。另外,因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下,DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。单独DAPI的最大吸收波长为340nm,最大发射波长为488nm;当DAPI与双链DNA结合时,最大吸收波长为364nm,最大发射波长为454nm10 mM Tris pH7.0100 mM NaCl10 mM EDTA),其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合,但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5,其发散光的波长范围约在500nm左右。

 

使用说明(仅供参考)

1. 配制工作液:用双蒸水或PBS稀释母液,配制成所需要的工作的浓度(0.5-10 μg/mL),工作液可于℃保存6个月。

2. 固定的细胞或组织染色:对于固定的细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色,则直接进行DAPI 染色。

a)对于贴壁细胞或组织切片:加入适量DAPI染色液,覆盖住样品即可。

对于悬浮细胞:至少加入待测染色样品体积3倍的染色液,混匀。室温放置3-5分钟。 

b)吸除DAPI染色液,用TBSTPBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。

c)直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm,发射波长460 nm

3. 活细胞或组织染色:

a)细胞培养物中加入适量DAPI染色液,约1/10细胞培养基体积,必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液,对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。 

b)在 37 ℃培养细胞 1020 分钟。

c)用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d)直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm,发射波长460 nm


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