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超微量 Na +K+–ATP 酶测试盒的样本前处理
更新时间:2023-12-01   点击次数:117次

 超微量 Na +K+–ATP 酶测试盒的样本前处理

(货号:A070-2测组织、培养细胞)

 

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二、样本的前处理:
1、组织的前处理:(组织匀浆上清液的制备参考实验方法学)
准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9 比例,加入 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,2500 /分,离心 10 分钟,取上清液(即 10%的匀
浆上清液),再用生理盐水 10 倍稀释成 1%,同时用考马斯亮蓝试剂测定组织蛋白(试剂本所有售)。如果预试结果太高,再将 1%的组织匀浆稀释成不同浓度再进行预试再决定取样浓度
2、培养细胞的前处理:将培养细胞消化,离心,弃上清,留下层细胞,每管加 0.20.3mL 生理盐水或匀浆介质制备成 10 /cm细胞悬液,即 10 /mL,再进行破碎。破碎细胞的方法有三种:①、用匀浆器匀浆。②、用超声粉碎器粉碎。③、反复冻溶 (第③种方法有时会影响酶活力)。制备好的细胞悬液不需要离心,同时用考马斯亮兰试剂测定组织蛋白(试剂本所有售)。再将细胞匀浆液稀释成不同浓度进行预试,根据预试结果决定取样浓度。
[注 1]:在测试加样前要摇匀后取样。
[注 2]:不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂作为样本匀浆或稀释样本。

[注 3]:预试结果将绝对吸光度值(测定—A 对照)控制在 0.2 左右为宜。

 

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