人外周血淋巴细胞分离液（FICOLL配制）使用说明1

人外周血淋巴细胞主要是指体内的淋巴细胞，主要包括T细胞和B细胞。外周血淋巴细胞能够帮助人体抵御外来的细菌和病毒，能够起到良好的免疫作用。人外周血淋巴细胞分离液（FICOLL配制）是一种用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。

产品名称：人外周血淋巴细胞分离液（FICOLL配制）

产品规格：200ml

储存条件：室温，避光

产品指标：

密度            1.077±0.001g/mL

渗透压        290~350mOsm/kgH2O

无菌           0.1μm 滤膜过滤

原理：根据血细 胞的密度差异（红细胞和粒细胞密度为1.090g/mL左右；淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090g/mL；血小板为 1.030~1.035g/mL），通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。

实验步骤（仅供参考）

1. 取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液 或者PBS稀释全血。

2. 在离心管中加入适量分离液，将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。

3. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min （血液的体积越大所需的离心力越大，离心 时间越长，佳的分离条件需摸索，离心转 速大不超过1200g）。

4. 离心后将出现明显的分层：上层是稀释的 血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分 离液之间的白膜层即为淋巴细胞层，离心管 底部是红细胞与粒细胞。

5. 小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心 管中， 10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层 细胞。250g，离心10min。

6. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。

7. 重复上一步骤弃上清，细胞重悬备用