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人外周血淋巴细胞分离液(FICOLL配制)使用说明1
发布时间:2021-11-02   点击次数:1649次

人外周血淋巴细胞分离液(FICOLL配制)使用说明1

人外周血淋巴细胞主要是指体内的淋巴细胞,主要包括T细胞和B细胞。外周血淋巴细胞能够帮助体抵御外来的细菌和病毒,能够起到良好的免疫作用。人外周血淋巴细胞分离液(FICOLL配制)是一种用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。

产品名称:人外周血淋巴细胞分离液(FICOLL配制)

产品规格:200ml

储存条件:室温,避光

产品指标:

密度            1.077±0.001g/mL

渗透压        290~350mOsm/kgH2O

无菌           0.1μm 滤膜过滤

原理:根据血细 胞的密度差异(红细胞和粒细胞密度为1.090g/mL左右;淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090g/mL;血小板为 1.030~1.035g/mL),通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。

实验步骤(仅供参考)

1. 取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血及组织稀释液 或者PBS稀释全血。

2. 在离心管中加入适量分离液,将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。

3. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min (血液的体积越大所需的离心力越大,离心 时间越长,佳的分离条件需摸索,离心转 速大不超过1200g)。

4. 离心后将出现明显的分层:上层是稀释的 血浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分 离液之间的白膜层即为淋巴细胞层,离心管 底部是红细胞与粒细胞。

5. 小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心 管中, 10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层 细胞。250g,离心10min。

6. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。

7. 重复上一步骤弃上清,细胞重悬备用



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