EZfusion同源重组酶多功能试剂盒,新鲜出炉
南京信帆生物所提供的 EZfusion Enzyme 专门为把 PCR 产物快速,定向,有效的克隆到任何目标载体而设计。有效的避免了在克隆过程中遇到的合适内切酶的选择,化,补平,加 A,使用中间载体等等一系列复杂步骤。
无需连接酶,只需要把目标载体线性化(平末端,粘性末端都可以),PCR 产物无需任何酶促处理,直接和目标载体混合,20 分钟一站式解决所有问题。无需蓝白班筛选,无需担心克隆方向,无须担心阳性克隆比率,随意挑取克隆,阳性率>99%.使用本试剂盒,可以定向克隆 12kb 的片段。
注意:
可以采用任何聚合酶来得到 PCR 产物,但是,引物和引物二聚体会对 EZfusion 有一定的抑制作用。如果 PCR 反应得到单一的目的条带,PCR 产物可以用 PCR 纯化试剂盒回收;如果 PCR 产生很多非特异性条带,应该用凝胶回收纯化目的条带。
适用范围:
1. PCR cloning into any vector
2. Long PCR DNA (up to 12kb) cloning
3. Gene transfer one vector to another
4. High-throughput (HTP) PCR cloning
5. In vitro joing of DNA fragments
线性化载体的制备 载体的*线性化对于重组实验至关重要,没有线性化的载体会产生非常高的背景。 线性化后的载体需要过柱纯化或者凝胶回收纯化。
转化 :
1. 新鲜制备的或-70℃下保存的 100ul 感受态细胞,置于冰上,*解冻后轻轻地将细胞均匀悬浮。
2. 加入 10-12ul 连接液,轻轻混匀,冰上放置 30 分钟。
3. 42℃水浴 90 秒,冰上放置 2 分钟。
4. 加 600ul SOC 培养基,37℃ 250rpm 振荡培养小时。
5. 室温下 4000rpm 离心 5 分钟,用吸头吸掉 500ul 上清液,用剩余的培养基将细胞悬浮。
6. 将细菌均匀细致得涂布在 90mm 平板上。 注:细菌的用量依连接的效率及感受态细胞的感受率而进行适当调整。
7. 平板在 37℃下正向放置 1 小时后以吸附过多的液体,然后倒置培养过夜。
信帆生物对质量的控制涵盖生物试剂、放行、市场质量反馈的全过程,包括原辅料、包装材料、工艺用水、中间过程及成品的质量标准和分析方法的建立、取样、检验和产品稳定性考察和市场不良反馈样品的复核等工作,确保产品的精确度、稳定性。我们确保销售给客户的产品是能够符合质量标准,适合客户要求的产品。
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