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EZfusion同源重组酶多功能试剂盒,新鲜出炉
发布时间:2020-07-24   点击次数:257次

EZfusion同源重组酶多功能试剂盒,新鲜出炉

 

南京信帆生物所提供的 EZfusion Enzyme 专门为把 PCR 产物快速,定向,有效的克隆到任何目标载体而设计。有效的避免了在克隆过程中遇到的合适内切酶的选择,磷酸化,补平,加 A,使用中间载体等等一系列复杂步骤。

无需连接酶,只需要把目标载体线性化(平末端,粘性末端都可以),PCR 产物无需任何酶促处理,直接和目标载体混合,20 分钟一站式解决所有问题。无需蓝白班筛选,无需担心克隆方向,无须担心阳性克隆比率,随意挑取克隆,阳性率>99%.使用本试剂盒,可以定向克隆 12kb 的片段。

 

注意:

可以采用任何聚合酶来得到 PCR 产物,但是,引物和引物二聚体会对 EZfusion 有一定的抑制作用。如果 PCR 反应得到单一的目的条带,PCR 产物可以用 PCR 纯化试剂盒回收;如果 PCR 产生很多非特异性条带,应该用凝胶回收纯化目的条带。

 

适用范围:

1. PCR cloning into any vector

2. Long PCR DNA (up to 12kb) cloning

3. Gene transfer one vector to another

4. High-throughput (HTP) PCR cloning

5. In vitro joing of DNA fragments 

 

线性化载体的制备 载体的完全线性化对于重组实验至关重要,没有线性化的载体会产生非常高的背景。 线性化后的载体需要过柱纯化或者凝胶回收纯化。

 

转化 :

1. 新鲜制备的或-70℃下保存的 100ul 感受态细胞,置于冰上,完全解冻后轻轻地将细胞均匀悬浮。

2. 加入 10-12ul 连接液,轻轻混匀,冰上放置 30 分钟。

3. 42℃水浴 90 秒,冰上放置 2 分钟。

4. 加 600ul SOC 培养基,37℃ 250rpm 振荡培养小时。

5. 室温下 4000rpm 离心 5 分钟,用吸头吸掉 500ul 上清液,用剩余的培养基将细胞悬浮。

6. 将细菌均匀细致得涂布在 90mm 平板上。 注:细菌的用量依连接的效率及感受态细胞的感受率而进行适当调整。

7. 平板在 37℃下正向放置 1 小时后以吸附过多的液体,然后倒置培养过夜。

 

信帆生物对质量的控制涵盖生产、放行、市场质量反馈的全过程,包括原辅料、包装材料、工艺用水、中间过程及成品的质量标准和分析方法的建立、取样、检验和产品稳定性考察和市场不良反馈样品的复核等工作,确保产品的精确度、稳定性。我们确保销售给客户的产品是能够符合质量标准,适合客户要求的产品。

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