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信帆生物教您革兰氏染色的小技巧
发布时间:2020-08-18   点击次数:182次

信帆生物教您革兰氏染色的小技巧

 

何为革兰氏染色
革兰氏染色是细菌鉴别染色方法中常使用的,染色结果可区分革兰氏阳性菌及阴性菌,是鉴定细菌重要的分类依据之一。染色有4种试剂:

初染剂:结晶紫,步骤中先使用的试剂,把细菌染成蓝紫色。

媒染剂:革兰氏碘液,可与初染剂结合,形成结晶紫及碘复合物(CV-I),加强染料颜色的固定。

脱色剂:95%乙醇,因阳性菌与阴性菌细胞壁构造不同,而有不同的脱色反应。

复染剂:番红,被上述步骤脱色的细菌,就会被这此试剂染成红色。

 

革兰氏染色原理:革兰氏染色法是由丹麦微生物学家汉斯-克理斯蒂安-革兰(Hans Christian Gram)于1884年发明,至今仍为鉴别细菌之重要方法。依据革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性以及革兰氏阴性两类。其染色原理推测与此两类细菌之细胞壁结构有重大关系。说法有二其一为:革兰氏阴性细菌的细胞壁含脂量高,酒精脱色时会将部份脂质萃取出来,而使细胞壁结构松动,通透性增加,故结晶紫-碘复合体(CV-I)被带出细菌体外而无色。

革兰氏阳性细菌的细胞壁几乎不含脂质,酒精甚至会使细胞壁脱水,故结构更加致密,结晶紫-碘复合体就被留在细菌体内。其二为:酒精处理时,会使细菌的细胞壁肽聚醣(peptidoglycan)空隙缩小。革兰氏阳性细菌之细胞壁肽聚醣较厚,而革兰氏阴性细菌较薄,所以造成结晶紫-碘复合体离开革兰氏阴性细菌的机会较大。故以酒精脱色后,取用红色的番红进行复染,此时无色的革兰氏阴性细菌就会变成粉红色,而原本已染上蓝色的革兰氏阳性细菌就会变成紫色。革兰氏

 

染色注意事项:不论何种染色法,基本都要先熟习抹片的制作,抹片应厚薄适中,且宜匀而薄,细菌量不宜太多。染色时,脱色步骤可影响结果正确与否,脱色过度会使初染剂流失,使革兰氏阳性细菌变为革兰氏阴性细菌的颜色:但脱色不足,则无法完全去除CV-I复合物,结果使革兰氏阴性细菌呈现革兰氏阳性细菌的颜色。

此步骤非常需要经验的累积。每种染剂之间,以蒸馏水或无菌水充分清洗,以除去剩余的染液。宜使用18-24小时培养的新鲜菌落,因老化的细菌易失去保留初染剂的能力,而显示出错误的结果,可能部分染成红色,部分呈紫色。建议每次染色时,可以带品管玻片一起染色,确定染色时间及步骤正确。

 

相关产品如下:

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