传统定量PCR方法详细说明！

实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。·
Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

 检测原理：

所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

检测方法：

1）内参照法：在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。

2）竞争法：选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 3）PCR－ELISA法：利用第高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗第高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。

信帆生物公司主要代理产品：
ELISA试剂盒：进口ELISA试剂盒,国产ELISA试剂盒,人elisa试剂盒，大鼠ELISA试剂盒，小鼠ELISA试剂盒等。
培养基：微生物培养基,显色培养基,BD培养基,gibco培养基等。
血清：胎牛血清,人血清,动物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原装血清 。
生物试剂：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等进口试剂。

标准品对照品：进口对照品,进口对照药材,进口标准品.
抗体：一抗,二抗，流式抗体等。
放免试剂盒：进口放免试剂盒，国产放免试剂盒，进口美国凤凰等放免试剂盒。
实验室代测服务：放免代测，WB实验，免疫组化代测，荧光定量PCR代测，病理细胞染色代测，生化实验代测等。

传统定量PCR方法详细说明！