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金黄色葡萄球菌新型的检测方法更实用
发布时间:2020-09-01   点击次数:198次

金黄色葡萄球菌新型的检测方法更实用

 

金黄色葡萄球菌也称“金葡菌”,隶属于葡萄球菌属,是革兰氏阳性菌代表,为一种常见的食源性致病微生物。该菌适宜生长温度为37℃,pH为7.4,耐高盐,可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中,空气、污水等环境中也无处不在。

检测方法

一,传统分离鉴定方法

世界上对食品中金黄色葡萄球菌的检测通常采用生化鉴定的手段,并在初期采用平板划线分离。当前我国检测食品中金黄色葡萄球菌依据国家标准《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》(GB4789.10-2016) [4] 中的方法进行。国家标准执行内容包括定性检测和定量检测两部分。在无菌条件下接种到肉汤中进行前增菌,将培养物接种划线,根据生化鉴定方法进行血清学鉴定。传统生化鉴定方法操作简单,稳定性强,成本低,是目前常用的鉴定方法。

二,免疫学检测方法

免疫学检测方法主要是基于免疫学理论研究,其是通过设计的抗原、抗体和免疫细胞,检测抗原和抗体的结合以及免疫细胞分泌的细胞因子的,从而达到检测目的一种实验方法。该技术方法主要包括酶联免疫法、免疫荧光法、免疫胶体金法等 。

①酶联免疫法:其原理是利用抗体与抗原在载体表面的特异性结合,加入某种酶,酶与抗体或抗原结合在一起,从而形成可以跟踪抗体或抗原的标记物,由于抗原或抗体与受检样品的反应产生抗原或抗体的复合物,此时加入酶反应显色底物,产物的量的大小与检测物质的量的大小呈正相关,分析显色从而确定样品中待检测物的含量。目前已经开发了几种根据 ELISA 技术用于检测培养上清液和食物样品 (例如干酪,土豆沙拉,火腿和牛奶)中的金黄色葡萄球菌 。

②免疫荧光法:免疫荧光技术利用荧光色素对抗体或抗原进行标记,然后检测目标抗原或抗体。抗原和抗体特异结合后,通过考察荧光信号的强弱进行定性定量检测。与酶介导的免疫测定相比,基于荧光的免疫测定具有提供高通量分析和灵敏度的更大潜力 。

③免疫胶体金法:该方法借助硝酸纤维膜为固定相载体,样品溶液通过毛细作用在试纸条中移动,在试纸条中同时加入了针对待检测物质特异性的抗原或抗体。与 ELISA 技术相比,免疫胶体金技术操作更为简单,对实验人员没有特别的技术要求,适合基层单位和现场诊断。但是免疫胶体金相比较 ELISA 法而言,灵敏度更低,且使用范围不广,需要进一步的研究。总体而言,免疫胶体金有着强大的发展潜力和广阔的应用前景 。

三,分子生物学检测方法

该技术主要包括聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术,核酸探针技术,环介导等温扩增技术等技术。

①聚合酶链反应技术:该方法的原理是在 DNA聚合酶的作用下,游离的脱氧核糖核酸参照碱基互补配对的原则,以模板 DNA为主链,通过提供一段引物,迅速的扩增 DNA 的双螺旋结构。PCR 技术特异性强、敏感度高,已广泛应用于医学、生物学等领域中。PCR 作为致病微生物的检测方法,稳定性强,是目前主流的检测方法。在微生物检测应用中,引物的设计以及靶序列的选择是 PCR 方法的核心。PCR 法同时也有一定的局限性,由于该方法需要对样品进行增菌,食品成分复杂,会对实验造成干扰。与其他方法相比,PCR 技术仪器设备价格高,需要花费的成本较高,推广普及需要一定的时间和资金支持。

②核酸探针技术:通过使用基因特异性核苷酸序列作为探针与目的 DNA 杂交的一种核酸杂交技术,通过检测该段特异性的标记物,从而判断是否含有目标微生物。核酸探针具有分子生物学检测技术的灵敏度高、特异性强的优点,但是实验周期长,操作繁琐,如果样品中目标微生物含量过低,极易造成样品目标微生物未检出,出现假阴性的实验结果。

③环介导等温扩增技术:该技术基于 DNA扩增技术,能够在恒温条件下,根据设计的多对引物,利用链置换型 DNA 聚合酶快速的进行核酸的扩增。与 PCR 方法比较,环介导等温扩增法操作更加快捷简单,花费成本较低,且对仪器要求低,能够广泛利用在食源性致病微生物的检测中。

 

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