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T4 DNA连接酶/T4 DNA Ligase
发布时间:2021-05-21   点击次数:182次

T4 DNA连接酶/T4 DNA Ligase

 

来源:含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌


活性定义:是指在ATP-PPi交换反应中,37℃、30分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量(weiss单位,1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位:20ul反应体系(50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端)中,在16℃、30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda DNA 产物所需的酶量)

 

抑制剂:当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时,可强烈抑制T4 DNA Ligase活性失活:65℃加热10分钟或70℃加热5分钟

 

注意:T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率,为避免此现象,电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理如下:样本与Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液(#R1151)混合,75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存;转化时,连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%;电转化之前,先用氯仿抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase,然后经乙醇沉淀纯化抽提产物

 

质量控制:测试表明无内切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、酶污染。功能检测:粘性末端或平末端DNA的连接能力

 

性状(以下信息仅供参考):液体。该酶催化双链DNA或RNA中毗邻的5'基团和3'-羟基末端之间形成二酯键,还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口,连接DNA的粘性和平末端,但该酶对单链核酸无酶活性。该酶需要辅因子ATP

 

用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)粘性末端或平末端双链DNA的连接;双链寡核苷酸接头与双链DNA连接;双链DNA、RNA或DNA-RNA复合体中缺口的修复;连接酶介导的RNA检测;位点特异性突变;扩增片段长度多态性

 

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