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中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)
更新时间:2022-11-03   点击次数:245次

中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)产品更新


碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)是一类于哺乳动物组织内广泛分布的磷酸酯酶,其活性在pH 9.2~9.8范围内最佳。它主要存在于附睾上皮之静纤毛、肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、肝的毛细胆管膜、微动脉和毛细血管动脉部之内皮等物质交换活跃之处(细胞膜),还可以出现在高尔基复合体、内质网、肠上皮之溶酶体、吞饮小泡、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。


中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),而不是采用金属沉淀法来显示其碱性磷酸酶的活性,它作用原理是在pH9.2~9.8的碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可以通过水解AB-BI磷酸盐,从而释放出萘酚与磷酸,前者与偶联重氮盐可以生成有色产物,定位于细胞质中。该染液专门用于骨髓细胞或血液涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色, 碱性磷酸酶活性部位位于胞桨,呈蓝色,结果比金属盐沉淀法更可靠。


操作步骤(仅供参考):

(一)、涂片

1、通过NAP固定液固定,制备新鲜血液或骨髓细胞涂片,充分水洗。

2、滴加准备好的NAP孵育液,孵育及水洗。

3、滴加甲基绿染色液或核固红染色液复染。水洗、晾干后镜检。

(二) 贴壁培养细胞

1、准备其他容器或6孔板培养的细胞,弃液,使用PBS清洗干净。

2、使用NAP固定液或多聚甲醛进行固定,PBS清洗。

3、滴加配制好的NAP孵育液,置于湿盒内,避光孵育,PBS清洗。

4、加入甲基绿染色液或核固红染色液复染。使用PBS清洗后镜检。


注意事项:


1、 应使用新鲜,薄厚适宜的骨髓细胞或血液涂片,避免影响酶的活性应当及时固定。


2、 培养细胞染色操作过程中,为避免损伤或丢失细胞,清洗、染色等步骤都应轻微。


3、 NAP孵育液降低阳性强度或易失效,实验室使用时应即配即用,不宜长久放置。


4、 复染时,取甲基绿染色液或核固红染色液二者其一。


5、 每次染色时,均应准备阳性对照片。


6、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



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