标题：人乳头瘤病毒16型纳米抗体的筛选及鉴定

使用单位：山西省中医药研究院中心实验室2.山西农业大学羊驼生物工程实验室3.君研生物科技(山西)有限公司4.东南大学附属中大医院医学院

摘要：目的：构建人乳头瘤病毒16型（HPV16） L1蛋白纳米抗体初级文库，通过筛选鉴定获得一株HPV16 L1特异性纳米抗体。方法：以HPV 16 L1蛋白为抗原对羊驼进行免疫，采用噬菌体展示技术构建初级抗体文库。经3轮淘选，采用ELISA法鉴定阳性克隆，将阳性反应最强克隆的VHH序列进行真核表达。经亲和纯化、凝胶过滤层析纯化、SDS-PAGE和WB法鉴定，获得目的纳米抗体；采用表面等离子共振（SPR）技术检测纳米抗体与HPV 16 L1蛋白之间的亲和力，CCK-8法检测纳米抗体对人永生化角质细胞HaCat的毒性，荧光素酶报告基因实验检测纳米抗体对HPV 16假病毒的中和活性。结果：初级文库库容为1.304×1010，丰度为6.5×10～9个/mL,ELISA法鉴定获得36个阳性克隆。表达、纯化获得蛋白单体与二聚体，经鉴定为目的纳米抗体（命名为Nb）。Nb与HPV 16 L1蛋白结合的亲和力为35.41 nmol/L。Nb实验组HaCat细胞增殖活力与空白组没有显著差异（P> 0.05）。与阴性组比较，0.1和1μmol/L Nb均能抑制假病毒感染293FT细胞（均P <0.01）。结论：成功获得一株纯度较好、亲和力较高，对上皮细胞没有明显毒性作用、有效抑制HPV 16假病毒感染293FT细胞的纳米抗体Nb，为防治HPV 16感染提供了有效的候选抗体类药物。

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